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高剂量硒对人外周血淋巴细胞的遗传毒性
硒(Se)是一种人体必需微量元素,1957年,由Schwarz等首次发现Se的营养作用.Se-Cys因其重要性被称作蛋白质的第21种氨基酸[1].食物中缺Se会引起一系列疾病,如癌症、心脏病、关节炎和免疫系统功能紊乱等.流行病学调查结果表明适量补Se有益于人体健康.但是由于Se具有有益和有害的双向性,其安全剂量范围较小,其有效剂量接近于中毒剂量,因此,有关Se对DNA损伤的保护作用及其剂量-效应关系值得深入研究.
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氟化物对大鼠颅骨成骨细胞DNA损伤的研究
我国是地方性氟病发生率较高的大国,由于氟过量摄入导致了许多患者心、脑、肝和肾等器官病变.骨骼是氟在体内主要蓄积的部位,长期过量摄入可导致骨代谢紊乱,引起全身性骨骼病变,即氟骨症.
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神经酰胺致HT-29细胞凋亡的DNA损伤通路的研究
结肠癌是常见肿瘤之一,在西方国家,其发病率在肿瘤中列第3位.近年来,结肠癌在我国的发病率和死亡率也呈明显上升趋势[1].近来研究表明,饮食中的神经鞘脂能抑制经DMH处理后的CF1小鼠结肠癌发病率[2],但是体外研究未发现鞘磷脂对结肠癌细胞有抑制作用.随后的研究发现,鞘磷脂代谢产物之一的神经酰胺可以抑制HT-29细胞的生长并诱导其发生凋亡[3-4],但其确切机制不明[1].神经酰胺是一种抑制性第二信使,能特异性地将细胞表面受体和环境应激所产生的信号与细胞核联系起来,引起多种细胞生物学效应[5].本研究以人结肠癌HT-29细胞为体外试验模型,采用单细胞凝胶电泳技术检测神经酰胺能否致HT-29细胞的DNA损伤,以进一步了解DNA损伤途径在外源性神经酰胺致人结肠癌HT-29细胞凋亡中的作用.
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羟基脲致雄性小鼠睾丸细胞DNA的损伤作用
目的 评价羟基脲(Hydroxyurea,HU)对睾丸细胞DNA损伤作用,为研究HU生殖系统损伤机制提供实验室数据,并为临床治疗过程中安全使用HU提供理论基础和依据.方法 以雄性小鼠经腹腔注射建立动物模型,HU剂量组分别为100、200和400 mg/kg,并设对照组,连续给药5 d,首次给药14 d后,用单细胞凝胶电泳技术,评价HU对雄性小鼠生殖系统的影响.结果 彗星实验结果显示,HU各剂量组中反映睾丸细胞DNA损伤的指标与对照组相比均明显增高(P<0.01),且DNA受损率随HU剂量增高而增高(P<0.01).结论 HU对小鼠睾丸细胞DNA有持续损伤作用,并抑制其损伤的修复.临床上大量和长期使用HU时,应充分考虑其生殖毒性作用的远期影响或采取一定的抑制措施.
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茶多酚对石英致肺巨噬细胞DNA损伤的保护作用
[目的] 探讨茶多酚对石英致大鼠肺巨噬细胞DNA损伤的保护作用.[方法] 将肺巨噬细胞分成生理盐水、石英、茶多酚及茶多酚+石英组.用单细胞凝胶电泳技术检测肺巨噬细胞彗星率出现和彗星尾长度.[结果] 低、中、高3种剂量的茶多酚+石英组的彗星出现率分别为66%、68%、67%,极显著低于石英组的78%(P<0.01);3种剂量的茶多酚加石英组彗星的尾长分别为12.6±2.2、13.6±1.17、12.9±2.6 μm,与石英组(18.7±2.7) μm 比较,极显著短于对照组(P<0.01).[结论] 茶多酚对石英致大鼠肺巨噬细胞DNA损伤有一定保护作用.
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微量全血中有核细胞单细胞凝胶电泳技术
单细胞凝胶电泳技术(single cel gel electrophoresis,SCGE),又称彗星试验(comet assay),是近年来发展起来的在单细胞水平上检测DNA断裂的方法,具有简便、快速和敏感的特点[1],已被广泛应用于毒理学、临床研究及人群监测等多种领域[2].
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单细胞凝胶电泳技术在军事毒理学中的应用
由Ostling和Jonhanson首先提出,后又经Singh和Olive建立和改进的单细胞凝胶电泳(Single Cell Gel Electrophoresis,简称SCGE)技术,因其细胞电泳形状颇似慧星,又称慧星试验(Comet Assay).它是一种测定和研究单个细胞DNA链断裂的新电泳技术,与传统方法相比,其简便、快速、灵敏、样品量少、无需放射性标记,具有极高的实用价值.
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饮水氯化消毒副产物MX对人胚肝细胞(L-02)的DNA损伤及凋亡作用
目的 研究饮水氯化消毒副产物3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(MX)致人胚肝细胞(L-02)DNA损伤及凋亡作用.方法 以L-02为靶细胞,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)分别检测MX致L-02细胞DNA损伤及凋亡作用.结果 随着MX浓度的增加,L-02细胞DNA链断裂逐渐增加,且100和300μmol/L剂量组与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异(P<0.05,P<0.01);MX各剂量组均引起L-02细胞凋亡率明显增加,与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异(P<0.001).结论 饮水氯化消毒副产物MX可致L-02细胞DNA单链断裂和凋亡.
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出生前氯氰菊酯与甲基对硫磷暴露对大鼠脑细胞DNA损伤的探讨
目的 探讨大鼠出生前暴露于农药氯氰菊酯和甲基对硫磷混配对胎鼠和子鼠脑细胞DNA的毒性效应.方法 48只Wistar大鼠在怀孕第1~15天每日一次采用甲基对硫磷、氯氰菊酯混配农药灌胃,1个对照组和3个暴露组,剂量分别为0、(0.0230+0.8000)、(0.0725+2.5265)和(0.2300+8.0000)mg/kg bw,相当于(0、1/300、1/95和1/30)LD50.分别取24只孕16天胎鼠大脑和24只出生后30天龄子鼠大脑,采用单细胞凝胶电泳技术分析脑细胞DNA的损伤.结果 甲基对硫磷和氯氰菊酯混配在中、高剂量水平可明显引起妊娠16天胎鼠脑细胞DNA的断裂(P<0.05),并存在明显的剂量-反应关系(r=0.836,P=0.000).在高剂量水平可引起出生后30天子鼠脑细胞DNA损伤的断裂(P<0.05);子鼠脑细胞DNA损伤程度比胎鼠减轻(F=15.81.P<0.05).结论 大鼠出生前暴露于甲基对硫磷和氯氰菊酯混配可引起神经细胞DNA链断裂损伤,呈现剂量-反应关系,在较低剂量水平DNA损伤能够被修复,而在较高剂量水平DNA损伤不能够被修复.
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单细胞凝胶电泳技术在环境卫生学中的应用
单细胞凝胶电泳技术是一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的技术,它具有快速、灵敏、简便等优点.近几年来, 该技术在国内外许多研究领域里得到越来越多的应用,逐渐成为一个新的研究热点.随着该技术的发展、成熟和完善,已经被引进环境卫生学研究,在检测和评价环境因素的遗传毒性等方面发挥着重要作用,应用该技术的报告也逐年增加.本文就该技术的基本原理及其在环境卫生学上的应用作一总结.
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甲醛吸入染毒大鼠致多组织细胞DNA损伤作用研究
我们通过建立大鼠吸入染毒模型,应用单细胞凝胶电泳技术研究甲醛所致组织细胞DNA损伤情况.
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阿糖胞苷对肺腺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制
目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对人肺腺癌细胞株A549的凋亡诱导作用及其机制.方法Ara-C体外作用于A549细胞,噻唑蓝还原法(MTT法)检测Ara-C对A549细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态学的变化;单细胞凝胶电泳技术(comet assay)测定A549细胞DNA的损伤程度;以Western blotting进一步证明A549细胞发生凋亡.结果Ara-C对A549细胞的增殖有明显抑制作用;观察到特异性的凋亡小体;Ara-C导致A549细胞发生DNA链断裂,并呈明显剂量依赖性增强:Western blotting显示caspase 8,9,3都不同程度被激活,多聚ADP核糖聚合酶(PARP)被剪切降解.结论揭示了Ara-C明显诱导A549细胞凋亡;细胞凋亡通路不仅通过线粒体途径,还通过膜受体途径,两条通路协同作用使凋亡信号增强;提示Ara-C对A549细胞有明显的化疗作用.
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单细胞凝胶电泳技术在运动医学中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)又称彗星实验(comet assay),是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的新技术.SCGE实验初由Rydbery和Johanson(1978)提出,以后经Ostling和Johansont[1](1984)及Singh[2](1988)等对实验条件进行改良,使其具有简便快速、灵敏性高、重复性好、无需放射性标记等优点,目前已被广泛应用于临床药物筛选、肿瘤诊断与治疗、衰老和细胞凋亡机制的探讨以及遗传毒理学和生物监测等研究领域[3-5].
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运动性氧应激与DNA损伤
1 DNA损伤的检测方法目前DNA氧化损伤的检测方法有多种,如微核实验(cytokinesis-block micronucleus,CBMN)[15]、高压液相层析法(high-pressure liquid chromatography,HPLC)[16]、电子自旋共振技术(electron spin resonance,ESR)和单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis assay,SCGE).
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单细胞凝胶电泳对o-PDA诱导CHL细胞基因组不稳定性的研究
基因组不稳定性是DNA接受损伤因素作用后重要的生物学效应.它不仅使受损细胞的损伤敏感性提高,加速损伤,而且具有传递性,即:基因组不稳定性所致的遗传效应并不是出现在受照细胞本身,而是以加强自发突变的形式表现在受照的子代细胞中[1].邻苯二胺是药物合成、染料、杀虫剂生产过程中的一种较为常见的副产品,是一种强的化学诱变剂[2].本实验主要采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)对化学诱变剂邻苯二胺(o-PDA)处理的CHL细胞及其经再次染毒子代细胞的彗星尾长进行测定与分析,初步探讨o-PDA诱发的CHL细胞基因组不稳定性.
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单细胞凝胶电泳技术及其在辐射生物学中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE),又称彗星分析(Comet assay),是利用断裂的DNA碎片在裂解液的作用下,从DNA的超螺旋结构中释放出来,在电泳时移向阳极的彗星样影像而对损伤的DNA进行检测的一种方法,是检测各种哺乳动物细胞DNA断裂的新技术[1].这种技术可以测定单个细胞DNA链的断裂,与传统方法相比,由于其简便、快速、敏感、所需样品量少,无需细胞处于生长状态和使用放射性同位素,故有很强的实用价值.SCGE已广泛用于环境生物监测、辐射生物学、遗传毒理学、药物筛选、毒物致癌机理、肿瘤发病机理、诊疗、衰老和细胞凋亡机理的研究.现就SCGE技术的原理和方法及其在辐射生物学领域的应用作一简要介绍.
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缺血性脑卒中患者血液中单个核细胞DNA损伤与修复的研究
本研究应用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE)对缺血性脑卒中患者急性期、恢复期血液中单个核细胞的DNA损伤与修复情况进行检测,并与同龄健康对照比较,以判断缺血性脑卒中患者DNA的损伤水平及与病程的关系.
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八氯二丙醚吸入染毒对小鼠DNA的损伤作用
目的研究八氯二丙醚吸入染毒对小鼠外周血细胞和肝、脾、肺细胞DNA的损伤作用,了解其损伤的可能靶部位.方法用八氯二丙醚对小鼠进行静式吸入染毒,采用微量血单细胞凝胶电泳技术(SCGE), 检测不同染毒浓度(282,564,1 128 mg/m3)及不同染毒时间(每天1 h,连续染毒3,6,9,12,15 d)八氯二丙醚对小鼠外周血细胞的DNA的损伤情况.结果染毒后小鼠血细胞DNA出现了明显损伤,表现为第3天时DNA损伤程度高,随后第6天、9天、12天、15天损伤降低并趋于稳定.肝、肺及脾细胞DNA亦出现了明显损伤,且存在明显的剂量-反应关系(P<0.05), 其中以肺细胞DNA损伤程度重.结论八氯二丙醚吸入染毒可引起小鼠外周血细胞及肝、脾、肺细胞DNA的损伤,提示肺细胞可能是主要靶细胞.
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正己烷致大鼠外周血有核细胞DNA损伤的实验研究
目的 研究正己烷(n-Hexane)对大鼠外周血有核细胞DNA损伤的影响,为其遗传毒性的研究提供实验数据.方法 40只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成5组,即低(75 mg/kg)、中(150 mg/kg)、高300 mg/kg)剂量染毒组,阴性对照组和阳性对照组(环磷酰胺),每组8只.经腹腔注射正己烷,染毒4周后,观察大鼠的一般状况和体重变化,用彗星试验技术(SCGE)检测大鼠外周血有核细胞DNA的损伤.结果 各组大鼠体重均持续增加,但高剂量组较对照组增长缓慢,差异有统计学意义(P<0.05).各染毒组动物无明显中毒症状.外周血有核细胞SCGE检测彗星尾长、尾DNA%、尾矩、Olive尾矩均增大.阳性对照组尾长(63.84±19.79)、尾DNA%(28.78±6.99)、尾矩(15.47±8.60)、Olive尾矩(10.60±4.89)分别与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).低、中、高剂量组与阴性对照组比较,尾长、尾DNA%差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).中、高剂量组与阴性对照组比较,尾矩,Olive尾矩差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).尾矩值与染毒剂量作相关分析,相关系数r为0.978,呈正相关(P<0.05).结论 正己烷可使大鼠外周血有核细胞DNA发生损伤,具有一定的遗传毒性.
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预防型抗氟剂(Ⅰ型-1)遗传毒性的实验研究
为了探讨预防型抗氟剂(Ⅰ型-1)的遗传毒性,选用雄性昆明种小白鼠30只,随机分为阴性对照组、低、中、高剂量组(剂量分别为200,400,800 mg/kg)、阳性对照组(环磷酰胺50 mg/kg)。剂量组灌胃,每天一次,连续5天。断头取血,进行微核试验和单细胞凝胶电泳实验(SCGE)。结果表明,剂量组不但微核率较低,而且也未出现彗星。提示,预防型抗氟剂(Ⅰ型-1)在200~800 mg/kg 剂量范围内对小鼠无遗传毒性。
关键词: 预防型抗氟剂(Ⅰ型-1) 遗传毒性 微核试验 单细胞凝胶电泳技术