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低锌浓度培养基对Caco2细胞二价金属离子转运体mRNA表达的影响
锌是人体必需的微量营养素之一,锌缺乏或过量与多种机能紊乱相关.二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)是近期发现的哺乳动物金属离子转运体,在机体所有组织几乎均有表达,具有对铁、锌等多种二价金属离子的转运功能[1].我们既往的实验结果显示膳食高锌可以导致断乳小鼠睾丸DMT1 mRNA表达显著降低,约为适锌时表达量的1/3~1/4,提示可能为哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制,但是脑组织中的DMT1 mRNA表达未见变化,提示在脑组织锌转运中DMT1可能不作为主要的转运体[2].小肠是锌吸收的重要场所,DMT1是否参与小肠锌吸收过程?我们以不同锌浓度培养的Caco2细胞为模型,观察其对DMT1 mRNA表达的影响及其规律,探讨DMT1在小肠锌吸收中的可能作用.
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175 用热水负荷损害小鼠睾丸模型进行益精生药的研究(2):淫羊藿与大蒜的促进精子生成作用
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174 用热水负荷损害小鼠睾丸模型进行益精生药的研究(1):羊乳的促进精子生成作用
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新生小鼠睾丸组织移植到裸鼠体内不同时期移植物的组织学观察
目的 通过测量不同发育时期移植物的重量及观察其中生精小管结构和生精细胞组成情况,对去势雄性小鼠中移植的新生小鼠睾丸组织生长和发育进行系统观察.方法 将出生1~2d昆明小鼠睾丸移植到7~12周去势雄性免疫缺陷小鼠背部;在移植后不同时间段 (分为3d、1~11周和3~6月16个组)取出移植物,计算移植物的回收率,测定移植物重量,观察移植物中生精小管结构及生精细胞的组成.结果 从移植的450个新生小鼠睾丸组织,回收到405个移植物,总回收率为90.0%.重量比移植前增加约40倍.移植物中生精小管的发育及各阶段生精细胞出现时间与在正常小鼠中所见基本相同.移植时间超过8周后,生精上皮的退化现象显著增加.结论 将新生小鼠睾丸组织异位移植到受体背部后的发育进程与在体情况相同,第1次生精波结束后的时间应为获取精子细胞和精子的佳时间,大约是移植后5~7周.
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雷公藤及铅镉对小鼠睾丸间质细胞NOS活性的影响
一氧化氮(NO)在睾丸内可促进生精过程和精子成熟,尚未见到有关雷公藤及铅、镉等重金属元素对睾丸间质细胞NOS活性影响的报道.本研究应用NADPH\|d黄递酶组织化学方法,对给与氯化镉、醋酸铅、雷公藤1、2、3、4周后小鼠睾丸间质内NOS活性变化进行观察,结果显示,正常组间质细胞呈NOS活性强阳性,而精曲小管管壁细胞均呈NOS活性阴性.
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腺病毒介导的基因转染对小鼠睾丸精子发生和生殖能力的影响
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三种冷冻保护剂对新生小鼠睾丸组织冷冻效果的比较
目的 探讨三种不同冷冻保护剂对新生C57BL/6J小鼠睾丸冷冻的效果.方法 5日龄C57BL/6J雄鼠睾丸组织,分别用3种不同冷冻保护剂(二甲基亚砜< dimethyl sulfoxide,DMSO>、丙二醇<propylene Glycol,PROH>、EFS20/40)进行玻璃化冷冻.复苏冷冻后的睾丸组织,每组一部分进行组织学分析,另一部分进行组织移植,移植后检测关键基因表达水平以及卵胞质内单精注射,并设相应对照组.结果 3个实验组睾丸组织形态改变与对照组相比均具有显著性差异(P<0.01),其中EFS组分值低即改变小;原位移植8周后组织块生长发育,存活率分别为DMSO组16.7%、PROH组13.3%、EFS组23.3%,存在成熟精子;睾丸组织特异性基因pgk-2和TESK1正常表达;卵胞质内单精注射表明移植后睾丸内精子均具有受精能力,胚胎移植后可得到正常子代小鼠(DMSO:PROH:EFS=5:2:8).结论 3种冷冻保护剂均能良好保存睾丸组织结构和功能.其中,EFS方法保存的睾丸组织形态改变小、功能完善更适于睾丸组织的冷冻.
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丙烯腈对小鼠睾丸组织形态学的影响
丙烯腈对雄性小鼠生殖系统具有细胞毒作用,我们通过雄性小鼠腹腔注射染毒,光镜结合病理图像分析仪定量测定,探讨丙烯腈染毒后小鼠睾丸组织学形态改变.
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亚硒酸钠对小鼠睾丸精原细胞及减数分裂影响
硒作为人体必需的微量元素,其营养价值和毒性作用早已知道.本实验室已对亚硒酸钠的细胞毒性、遗传毒性、生殖毒性以及胚胎毒性[1,2].为了解硒的生殖毒性作用,本文进一步观察亚硒酸钠对小鼠生精细胞的影响.
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小鼠睾丸精母细胞染色体畸变测定方法比较
电磁辐射和化学因子可诱导生殖细胞突变造成不育、先天畸形、流产、死胎和肿瘤,而睾丸生殖细胞染色体畸变检测是检测生殖细胞遗传损伤的一种简便常规方法,该方法已纳入农药登记毒理学方法[1]、食品安全性毒理学评价程序和方法[2]等国家标准执法检测程序.随着工业的发展和卫生监督工作的加强,将有越来越多的健康相关产品进行此项测试.在上述国家标准程序中规定的睾丸精母细胞染色体检测方法均为醋酸软化法,在实际操作中,因该方法存在软化程度不易掌握、细胞密度大、获取中期相细胞数量难以保证的欠缺,给镜下分析工作带来困难.本试验用改良Evans法与醋酸软化法做一对比试验.
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VE和氟化物对小鼠睾丸脂质过氧化的联合作用
氟是机体生命活动所必需的微量元素之一,但过量的氟摄入可对机体产生明显损害.已有文献[1,2]报道,氟对雄性生殖系统具有毒性作用.一般认为,脂质过氧化作用增强是氟化物引起雄性生殖系统损害的主要机制,具体抗氧化作用的硒或维生素C(VC)具有拮抗作用[3,4].但具体机制还不清楚.维生素E(VE)与动物生殖和精子生成有关,同时又是公认的自由基清除剂.因此,本研究通过对雄性小鼠染氟同时给予一定剂量的VE,探讨VE和氟化物联合作用对雄性小鼠睾丸组织脂质过氧化的影响.
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骨髓间充质干细胞衍生的精原干细胞
近年来精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSC)研究有两个具有重要意义的研究进展,一个进展是从新生小鼠[1]和成年小鼠睾丸[2]生殖细胞通过分离、基因分选、培养的SSC在胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)培养条件下获得ESC特征,在离体条件下具有自发形成3个胚层的分化能力,在皮下注射这些细胞至免疫缺损小鼠,可以形成畸胎瘤;另一个进展是从骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)在离体培养条件下,通过基因挑选和改变培养条件可以衍生出具有精原干细胞和精原细胞分子特征的生殖细胞[3].
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下丘脑-垂体-性腺轴在FKBP12.6缺失介导的性别差异性心肌肥大发生发展过程中的作用及其分子机制
目的:我们的前期研究发现,敲除FKBP12.6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12.6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法:手术摘除FKBP12.6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响;放射性免疫检测法(RIA)和ELISA法检测FKBP12.6敲除小鼠17β-estradiol (E2)、testosterone (T)、LHβ和FSHβ分泌变化情况;建立垂体神经元LβT2 FKBP12.6shRNA载体稳定干扰细胞系,采用Fluo3-AM荧光探针检测[ Ca2+] i;real-time PCR检测LHβ、FSHβ、calci-neurin(CaN)等mRNA表达变化;分离胞浆胞核蛋白,Western blot法检测CaN、MCIP1.4、NFAT3、Nur77、Pin1等蛋白表达和核浆分布情况。结果:摘除雄性FKBP12.6基因敲除鼠的睾丸可显著抑制心肌肥大的发生;FKBP12.6敲除小鼠心脏中可能促进心肌肥大的通路CaN和CaMKⅡ的表达和活性并未发生明显变化;血清E2、T、LHβ及FSHβ水平与WT相比显著上调,表明敲除小鼠性腺轴调控增强;LβT2 FKBP12.6干扰后[ Ca2+] i 显著上升;性腺轴相关基因LHβ、SF-1、Nur77和钙离子相关基因CaN、MCIP1.4、SERCA2的mRNA表达显著上调;胞浆中CaN和MCIP1.4蛋白水平上调;NFAT3、Nur77和Pin1核转位明显增加。结论:FKBP12.6缺失后垂体细胞内钙离子水平上调,激活CaN/NFAT3通路,进而促进LHβ和FSHβ转录,导致下丘脑-垂体-性腺轴激活,从而诱发性别差异性心肌肥大。
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诱导分化在恶性肿瘤及白血病治疗中的应用
1960年Pierce首先发现小鼠睾丸畸胎瘤细胞可自发地分化成良性的正常细胞,证实了上世纪50年代提出的是否可通过诱导肿瘤细胞分化来治愈恶性肿瘤,开创了恶性肿瘤的分化诱导研究.
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VitE慢性镉中毒小鼠生精细胞影响的形态观察及立体定量分析
昆明种雄性小鼠75只随机分成三组:镉组(2mg/kg/次,皮下注射,2次/周);镉 +VitE组(染镉同时给VitE10mg/kg/ 天)和正常对照组(注射等量生理盐水).3月后取睾丸按常规制成HE染色切片和超薄切片,分别用光镜和H-600型透射电镜观察,并用BiaMias图像分析软件,P-Ⅱ计算机图像分析系统对各组精原细胞和精子的部分超微结构进行了立体定量分析.结果如下:1.镉组小鼠睾丸均受损,根据受损程度可分三型.轻型:有散在少量的生精细胞变性、坏死.变性细胞的胞质内细胞器肿胀,核体积略增大;坏死细胞的核固缩、溶解,胞质内出现空泡,胞膜破裂,细胞溶解.中型:部分生精上皮变薄,有较多生精细胞变性、坏死、脱落,偶见生精小管上皮坏死、溶解.重型 :全睾生精小管上皮已全部坏死、溶解,管壁结构分辨不清,管腔内充满嗜酸性凝固物质. 间质内纤维大量增生.与正常对照组相比,精原细胞胞核和精子胞核的平均截面积、平均表面积和平均体积均显著缩小(P<0.05).2.镉+VitE组大部分小鼠睾丸的形态结构正常,仅少部分小鼠的睾丸有轻、中型损伤,且以轻型损伤为主.与正常对照组相比, 精原细胞胞核和精子胞核的平均截面积、平均表面积和平均体积无显著性差异(P>0.0 5).与镉组相比,相应形态参数则明显增大(P<0.05).表明VitE对镉引起的小鼠生精细胞形态学损伤有一定拮抗作用.
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一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法
目的 建立一种用于免疫荧光实验的小鼠睾丸细胞涂片的快速制备新方法.方法 分别给出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3h后取睾丸组织剔除白膜,分离曲精小管进行剪碎,加入冷PBS重悬细胞,过滤,并用冷PBS洗涤细胞3次,然后低渗处理,后经多聚甲醛固定后铺片.对细胞核进行DAPI染色,并以21 d小鼠睾丸涂片为例进行免疫荧光实验,检测所制备的细胞涂片的质量.结果 所制备的小鼠睾丸细胞涂片经DAPI染色,每张细胞涂片均分布大量生殖细胞,背景清晰,根据细胞核的大小与着色,可初步判断生殖细胞类型;用不同发育阶段小鼠所制备的睾丸细胞涂片,细胞分布类型有很大差异,其中28 d小鼠制备的睾丸细胞涂片中生殖细胞类型多;以21 d小鼠睾丸细胞涂片为例进行免疫荧光实验,红色和绿色荧光标记的目标蛋白在精母细胞中表达清晰,背景干净,说明所制备的细胞涂片适合于免疫荧光检测.结论 成功建立了一种快速制备小鼠睾丸细胞涂片的新方法.
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P63在小鼠睾丸发育过程中的表达
关键词: 小鼠睾丸 -
X-线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮内Ghrelin表达的研究
目的 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达变化的意义.方法 采用辐射剂量1.0 GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16 h、2 w和4 w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测Ghrelin的表达及变化.结果 正常小鼠睾丸Ghrelin表达主要集中在睾丸间质的间质细胞,生精上皮呈阴性反应,照射后Ghrelin间质细胞为阴性,而生精上皮内出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,支持细胞未见阳性反应.但随照射时间延长,Ghrelin表达逐渐减少.结论 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达的变化,表明Ghrelin及其受体GHS-R系统在小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程中具有一定的调节作用.
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六种化合物诱发小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变实验研究
某些化学因子对生殖细胞所产生的突变效应,不仅可影响本代,而且可遗传给后代.睾丸初级精母细胞染色体畸变实验是一种以初级精母细胞为靶细胞的致突变实验.它以整体哺乳动物来检测化学物质对睾丸染色体可遗传的损伤,其方法简便,检测终点明确,因此,我们应用该方法对已知六种可引起生殖细胞突变的化合物进行了测试,旨在对这一方法进行验证,并选择佳阳性剂量.