人canstatin基因转化盐藻反应器真核表达载体的构建
摘要： 目的:构建人canstatin基因转化盐藻反应器的真核表达载体.方法:采用RT-PCR扩增得到人canstatin cDNA,克隆到pMD18-T载体形成pMD18-T/Can重组质粒.对pMD18-T/Can进行酶切鉴定和测序鉴定,将鉴定正确的canstatin基因定向连接到真核表达载体pUΩ上,然后连接上筛选标记bar盒,构建了含有人canstatin基因的真核表达载体pUΩ-Can-Bar.结果与结论:鉴定结果显示,转化盐藻反应器的真核表达载体pUΩ-Can-Bar构建成功.
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二氧化锰包覆的聚乳酸羟基乙酸共聚物载血卟啉单甲醚纳米粒的药动学检测和抑瘤效果
目的:考察二氧化锰包覆的聚乳酸羟基乙酸共聚物载血卟啉单甲醚(HMME)纳米粒(PLGA/HMME@MnO2)的药动学和对肿瘤的抑制作用.方法:对SD大鼠尾静脉注射HMME、PLGA/HMME和PLGA/HMME@MnO2,采用高效液相色谱法考察3种制剂在大鼠体内的药动学特征.S180荷瘤小鼠肿瘤模型建立后,动物分组如下:生理盐水组、生理盐水+激光组、HMME+激光组、PLGA/HMME+激光组、PLGA@MnO2、PLGA/HMME@MnO2+激光组,其中HMME给药剂量为3.0 mg/kg,尾静脉注射给药,2 d给药一次,共5次.给药4 h后在肿瘤部位施加532 nm激光(1.5 W/cm2,1.5 min)照射.记录分析相对肿瘤体积变化和体重变化.结果:与HMME相比,PLGA/HMME和PLGA/HMME@MnO2均延长了药物在血液中的循环时间,半衰期分别为HMME的2.71和9.32倍.治疗结束时,PLGA/HMME@MnO2+激光组相对肿瘤体积小(1.49±0.44).结论:PLGA/HMME@MnO2延长了HMME的血液循环时间,并提高了其光动力抗肿瘤效果.
关键词： 血卟啉单甲醚 聚乳酸羟基乙酸共聚物 二氧化锰 药物动力学 -
异甘草素对小儿血管瘤内皮细胞生物学特性及PI3K/AKT信号通路的影响
目的:探讨异甘草素对小儿血管瘤内皮细胞生物学特性及PI3K/AKT信号通路的影响.方法:将培养的小儿血管瘤内皮细胞分为4组,分别用0、20、40和80μmol/L异甘草素处理24、48、72 h,采用MTT法检测细胞活力.处理72 h后,采用Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、CyclinB1、MMP-9和p-AKT mRNA和蛋白的表达.结果:异甘草素能够呈时间、浓度依赖性地抑制小儿血管瘤内皮细胞生长;随异甘草素作用浓度的升高,侵袭细胞数和G0/G1期细胞百分比均逐渐降低,而G2/M期细胞百分比及细胞凋亡率均逐渐升高;Cleaved Caspase-3、Bax mR-NA和蛋白表达水平逐渐升高,而CyclinB1、MMP-9、p-AKT mRNA和蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05).结论:异甘草素可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制小儿血管瘤内皮细胞的生长和侵袭,诱导细胞周期阻滞,并促进细胞凋亡.
关键词： 血管瘤 异甘草素 血管内皮细胞 PI3K/Akt信号通路 儿童 -
消痰化瘀利窍方对慢性间歇性低氧暴露大鼠血压与心肌损伤的影响
目的:观察消痰化瘀利窍方对慢性间歇性低氧(CIH)暴露大鼠血压和心肌损伤的影响.方法:48只雄性SD大鼠随机分为常氧组、CIH组、CIH+中药干预组和常氧+中药干预组,每组12只.CIH组和CIH+中药干预组大鼠于舱内暴露于CIH环境21 d.每天暴露前给予CIH+中药干预组和常氧+中药干预组大鼠消痰化瘀利窍方灌胃(生药量24 g/kg).实验前和实验第7、14、21天测定大鼠尾动脉收缩压.造模结束后,应用PowerLab信号采集系统记录大鼠肾交感神经活性(RSNA),应用ELISA法检测血清去甲肾上腺素(NE)水平,取左心室称重并行HE、Masson染色观察.结果:常氧组和常氧+中药干预组大鼠尾动脉压无明显变化,CIH组和CIH+中药干预组大鼠尾动脉收缩压逐渐升高(P<0.05),CIH+中药干预组升高幅度小于CIH组(P<0.05).CIH暴露可使大鼠RS-NA、血清NE水平、左心室质量/体重的比值增加(P<0.05),中药干预可拮抗CIH暴露导致的上述变化(P<0.05).CIH组大鼠左心室心肌细胞排列紊乱,纤维化增多;CIH+中药干预组心肌组织学变化较CIH组明显减轻.结论:消痰化瘀利窍方可以通过降低RSNA,改善CIH诱导的高血压状态和心肌损伤.
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高糖环境对大鼠髓核细胞基质代谢的影响
目的:探讨高糖环境对大鼠髓核细胞基质代谢的影响.方法:选取4～6周龄的SD大鼠30只,分离与培养髓核细胞.分别用5、15、25 mmol/L的葡萄糖干预髓核细胞,观察细胞生长情况,实时荧光定量PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖mRNA的表达,Western blot法检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4、P38及磷酸化P38蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养液中CTX-Ⅱ质量浓度,免疫细胞化学染色法检测Ⅱ型胶原蛋白的表达.结果:25 mmol/L组髓核细胞生长较5、15 mmol/L组减缓(P<0.001).与其他两组比较,25 mmol/L组细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖mRNA表达水平降低,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,CTX-Ⅱ含量增加,MMP-3及MMP-13表达升高,P38磷酸化水平增加(P均<0.05).结论:高浓度葡萄糖可抑制髓核细胞的生长,并通过诱导P38磷酸化,抑制基质合成,增加基质降解.
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胶质瘤致病相关蛋白1对肺癌A549细胞生长及分化的影响
目的:观察胶质瘤致病相关蛋白1(GLIPR1)对肺癌A549细胞生长及分化的影响,以期为肺癌药物的研制提供线索.方法:构建重组慢病毒Lenti-GLIPR1和包含GLIPR1胞外可溶性区段(GLIPR1-S)基因片段的Lenti-GLIPR1-S,感染A549细胞后,通过Western blot法检测GLIPR1或GLIPR1-S蛋白的表达,细胞计数法检测细胞生长,免疫细胞化学法观察细胞分化.结果:A549细胞经慢病毒Lenti-GLIPR1和Lenti-GLIPR1-S感染后,均可表达相应蛋白,细胞生长受抑,细胞形态发生改变,向肺上皮细胞分化.结论:感染GLIPR1和GLIPR1-S均可促进A549细胞向肺上皮细胞分化,抑制A549细胞的生长.
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抑制ERBB2基因对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响
目的:探讨抑制ERBB2基因表达对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用脂质体法将ERBB2 siRNA转染至肝癌HepG2细胞,记为实验组(ERBB2-siRNA组),以siRNA对照转染的细胞记为阴性对照组(Con-siRNA组),将不经任何处理的细胞记为空白对照组.采用qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测HepG2细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、AKT和p-AKT蛋白表达水平.结果:在HepG2细胞中转染ERBB2 siRNA能够抑制ERBB2的表达(P<0.05).与Con-siRNA组比较,抑制ERBB2的表达后细胞生长和克隆形成能力明显被抑制,细胞周期发生G0/G1期阻滞,细胞中PCNA和p-AKT蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:抑制ERBB2基因表达可抑制肝癌HepG2细胞的生长,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活有关.
关键词： ERBB2基因 肝癌 HepG2细胞 细胞生长 PI3K/Akt信号通路 -
高迁移率族蛋白2在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞生物学活性的影响
目的:探究高迁移率族蛋白2(HMGB2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及对HCC细胞生物学活性的影响.方法:利用TCGA和GEO公共数据库数据,分析HMGB2 mRNA在HCC组织中表达的特点.采用Western blot法检测正常肝细胞LO2和HCC细胞SMMC7721、Hep3B中HMGB2蛋白的表达.分别用HMGB2 siRNA和阴性对照siRNA转染SMMC7721和Hep3B细胞,采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell体外迁移实验检测侵袭能力,流式法检测细胞周期和凋亡,以未转染细胞为空白对照.结果:HCC组织中HMGB2 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),TNM分期晚、分化程度低和甲胎蛋白高表达的HCC组织HMGB2 mRNA表达水平更高(P<0.05);Kaplan-Meier法生存分析结果显示,HMGB2 mRNA高表达者的总体生存期、无进展生存时间小于低表达者(P<0.05).与空白对照和阴性对照siRNA转染细胞相比,HMGB2 siRNA转染的SMMC7721和Hep3B细胞中HMGB2蛋白表达降低,细胞增殖、侵袭能力降低(P<0.05),细胞被阻滞于G0/G1期(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05).结论:HMGB2高表达能够促进HCC细胞的增殖、侵袭能力,有望成为HCC诊断及治疗的新靶点.
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PolyI:C复合物对小鼠体内非小细胞肺癌移植瘤的作用
目的:探讨PolyI:C复合物对小鼠体内非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤的作用.方法:将C57BL/6小鼠随机分为4组,每组6只,均皮下注射LL/2细胞建立NSCLC移植瘤模型.当肿瘤体积达到100 mm3时,滴鼻组每隔1天PolyI:C滴鼻1次(0.3 mg/次),肌注组每隔1天肌内注射PolyI:C 1次(0.3 mg/次),PBS组每隔1天PBS滴鼻1次(100μL/次),PD1组腹腔注射PD1(100μg/次,1周1次).用药2周后处死小鼠,剥离移植瘤及脏器组织,TUNEL法检测移植瘤组织内细胞凋亡,HE染色观察各脏器肿瘤转移情况.结果:给药后4组小鼠体重均逐渐增加,但肌注组小鼠体重增加幅度小于其他3组(P<0.05).滴鼻组和肌注组移植瘤体积较PBS组减小(P<0.05),而肌注组减小更为显著(P<0.05).滴鼻组、肌注组和PD1组抑瘤率分别为(38.33±0.05)％、(50.39±0.03)％、(15.17±0.05)％,肌注组抑瘤率高(P<0.05).滴鼻组、肌注组及PD1组肿瘤细胞凋亡均较PBS组增强,且肌注组变化为显著(P<0.05).肌注组小鼠各脏器均未发生转移.结论:PolyI:C复合物对小鼠体内NSCLC移植瘤具有明显的抗肿瘤、抗转移作用.
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大鼠H9c2心肌细胞中SK2通道和JP2蛋白的表达及定位
目的:研究大鼠H9c2心肌细胞中SK2通道和JP2蛋白的表达及定位,探讨二者的相互作用.方法:采用Western blot检测SK2通道及JP2蛋白在H9c2细胞中的表达,免疫共沉淀鉴定JP2与SK2通道之间的相互作用,免疫荧光标记观察SK2通道和JP2蛋白在H9c2细胞的定位.结果:心肌细胞H9c2表达SK2通道及JP2蛋白,SK2通道和JP2蛋白可形成免疫复合物,SK2通道和JP2蛋白存在部分共定位.结论:心肌细胞H9c2中SK2通道与JP2蛋白存在相互作用.
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rhMG53作为低温保护剂对小鼠BMSCs生物学特性的影响
目的:探讨重组人MG53蛋白(rhMG53)作为干细胞低温保护剂的特殊组分对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)冷冻保存后生物学特性的影响.方法:常规培养BMSCs,分为对照组(DMEM/F12培养基、FBS、DMSO的体积比为5:4:1并添加30 mg/L BSA)和rhMG53组(DMEM/F12培养基、FBS、DMSO的体积比为5:4:1并添加30 mg/L rhMG53)冻存.冻存1 a后,复苏细胞,qRT-PCR检测两组细胞冻存复苏后干性相关基因Nanog、OCT4和SOX2 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖;台盼蓝染色检测细胞存活能力;茜素红S染色和油红O染色分别检测两组干细胞的成骨和成脂分化;免疫荧光检测两组细胞成神经分化相关因子DCX和NSE的表达.结果:与对照组相比,rhMG53组BMSCs的Nanog、OCT4和SOX2 mRNA表达无明显变化(P>0.05),但细胞增殖能力增强,存活率升高,成骨、成脂和成神经分化效率增加(P均<0.05).结论:rhMG53作为保护剂的特殊组分对冷冻保存的BMSCs有较好的保护效果.
