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人偏肺病毒感染小鼠肺内Toll样受体表达及PolyI:C对病毒感染的影响
探讨人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后肺组织Toll样受体(TLRs)表达变化及PolyI:C对病毒复制的影响.实验小鼠分为hMPV感染组、polyI:C+hMPV组、polyI:C+DMEM组、DMEM对照组,均在滴鼻后1、3、5、7、9和16d处死,取肺组织用于病毒滴度测定、病理检查、通过RT-PCR和实时荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织内TLRs mRNA的表达.结果显示:①与hMPV感染组相比,polyI:C+hMPV组小鼠肺内病毒复制水平明显减低,仅在感染后第5d及第7d检测到病毒;病理检查结果亦提示肺部炎症明显减轻.②RT-PCR结果提示:hMPV感染组小鼠与DMEM对照组相比,肺组织内大部分TLRs mRNA表达均升高.③实时荧光定量PCR结果提示:hMPV感染后小鼠肺组织TLR7-8 mRNA增高为显著,且有时间依赖性;滴鼻后24h,polyI:C+hMPV组TLR3的表达明显升高.提示:人偏肺病毒感染BALB/c小鼠后,可上调小鼠肺组织Toll样受体表达,其中TLR7/8途径可能在启动天然免疫应答中起着重要作用;polyI:C可通过早期活化TLR3,抑制hMPV在小鼠肺内的复制,并减轻肺部炎症.
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TLR3途径诱导多发性骨髓瘤细胞株增殖抑制和凋亡机制研究
目的 研究聚肌苷酸胞苷酸( polyI:C)激活的TLR3通路对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制和凋亡相关的生物学作用及相关机制.方法 RPMI8226细胞培养于RPMI 1640培养基,以不同浓度的polyI:C与该细胞作用不同的时间.收集细胞后,分别利用CCK-8和流式细胞术分析其增殖抑制和凋亡情况,同时抽提总RNA,相对定量PCR测定TLR3通路相关基因表达.结果 PolyI:C对RPMI8226的增殖抑制效应随着作用剂量的增加和时间的延长而增加,24h:12.30％±2.04％、22.50％±2.20％、37.90％±1.30％;48h:17.80％±1.52％、29.60±0.85％、45.80％±1.68％;72 h:25.10％±1.01％、34.60％±1.27％、60.50％±2.08％,差异有统计学意义(P＜0.05).浓度为50、100、200μg/ml的polyl:C与RPMI8226作用48 h后,细胞凋亡率分别为5.60％±1.06％、8.71％±1.06％、13.93％±1.17％,差异具有统计学意义(P＜0.05),而且随着polyI:C作用浓度增加,RPMI8226细胞中TLR3和TRIF mRNA相对于内参β-actin的表达均显著增高,TLR3:1.41±0.10、2.24±0.16、4.08±0.13;TRIF:1.07±0.16、1.97±0.13、3.56±0.19,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR3途径可以有效地抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并且诱导其凋亡,对多发性骨髓瘤的生物治疗具有潜在应用价值.
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聚肌苷酸胞苷酸注射抑制HBV表达研究
目的 探讨PolyI:C注射活化机体天然免疫系统对HBV表达的影响.方法 pAAV/HBV1.2质粒高压注射小鼠构建HBV质粒慢性携带动物模型,PolyI:C注射观察其对pAAV/HBV1.2质粒表达HBV的抑制影响.结果 pAAV/HBV1.2质粒高压注射C57BL/6鼠形成HBV持续携带,PolyI:C注射能显著抑制HBV表达(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 PolyI:C注射可以促进C57BL/6鼠抑制HBV表达,这对今后的HBV免疫治疗具有一定的启示意义.
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TLR4通路对polyI:C诱导肝癌细胞凋亡的影响
目的:研究TLR4信号通路活化对 polyI:C诱导人肝癌细胞系H7402凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:用TLR4激动剂LPS处理H7402细胞 24 h后,转染polyI:C刺激24 h,然后利用流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测凋亡基因及胞内RNA模式识别受体TLR3、MDA5、RIG-I和LGP2的表达,Western blot检测识别受体的蛋白表达水平.结果:LPS预处理,减弱了polyI:C诱导H7402细胞凋亡的作用.同时,促凋亡基因Noxa的表达水平降低.在此过程中polyI:C的胞内识别受体RIG-I、MDA5的基因和蛋白水平表达下调.结论:LPS可能通过降低H7402细胞内dsRNA识别受体的表达,抑制了polyI:C诱导H7402细胞凋亡的作用.
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原发性胆汁性胆管炎小鼠模型肝内趋化因子CXCL13的表达
目的 原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者肝内趋化因子CXCL13表达显著增加,但其来源和机制尚不明确.文章旨在通过建立PBC小鼠模型,探索PBC小鼠肝内趋化因子CXCL13的表达及其主要来源细胞. 方法 采用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为实验组[n=20,腹腔注射聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly I:C,2次/周,共12周)]和对照组(n=10,腹腔注射,系同实验组等体积磷酸盐缓冲液).酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清AMA水平,HE染色观察肝组织炎症细胞浸润情况.原位灌注酶消化结合磁珠分选法分离小鼠肝内Kupffer细胞、肝血窦内皮细胞以及肝内淋巴细胞,荧光定量PCR检测肝组织以及上述细胞亚群CXCL13 mRNA表达水平. 结果 实验组小鼠血清AMA水平随建模时间延长逐渐上升,首次注射Poly I:C后第4、8、12周阳性率分别为5.9%、52.9%以及76.5%,而对照组小鼠血清AMA水平在整个建模过程中均呈现较低水平,仅在第12周时有2只小鼠AMA水平略高于阳性界值.实验组和对照组小鼠肝组织HE染色结果表明,实验组小鼠肝内汇管区大量炎症细胞浸润,而对照组小鼠肝内未见炎症细胞浸润.流式细胞术检测实验组小鼠Kupffer细胞、肝血窦内皮细胞的分离纯度分别为76%~80%、68%~72%.与Kupffer细胞CXCL13 mRNA表达[2.34(0.22-8.64)]比较,肝血窦内皮细胞、肝内淋巴细胞表达下降[0.27(0.03-1.64)、0.05(0-0.22),P<0.05]. 结论 Poly I:C诱导建立的PBC小鼠模型中肝内升高的趋化因子CXCL13主要来源于Kupffer细胞.
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PolyI:C复合物对小鼠体内非小细胞肺癌移植瘤的作用
目的:探讨PolyI:C复合物对小鼠体内非小细胞肺癌(NSCLC)移植瘤的作用.方法:将C57BL/6小鼠随机分为4组,每组6只,均皮下注射LL/2细胞建立NSCLC移植瘤模型.当肿瘤体积达到100 mm3时,滴鼻组每隔1天PolyI:C滴鼻1次(0.3 mg/次),肌注组每隔1天肌内注射PolyI:C 1次(0.3 mg/次),PBS组每隔1天PBS滴鼻1次(100μL/次),PD1组腹腔注射PD1(100μg/次,1周1次).用药2周后处死小鼠,剥离移植瘤及脏器组织,TUNEL法检测移植瘤组织内细胞凋亡,HE染色观察各脏器肿瘤转移情况.结果:给药后4组小鼠体重均逐渐增加,但肌注组小鼠体重增加幅度小于其他3组(P<0.05).滴鼻组和肌注组移植瘤体积较PBS组减小(P<0.05),而肌注组减小更为显著(P<0.05).滴鼻组、肌注组和PD1组抑瘤率分别为(38.33±0.05)％、(50.39±0.03)％、(15.17±0.05)％,肌注组抑瘤率高(P<0.05).滴鼻组、肌注组及PD1组肿瘤细胞凋亡均较PBS组增强,且肌注组变化为显著(P<0.05).肌注组小鼠各脏器均未发生转移.结论:PolyI:C复合物对小鼠体内NSCLC移植瘤具有明显的抗肿瘤、抗转移作用.
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PolyI：C对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究
目的：观察特异性激活Toll样受体3（Toll‐like receptor 3，TLR3）‐Toll／IL‐1受体结构域接头分子（Toll／IL‐1 receptor domain containing adaptor inducing IFN‐β，TRIF）信号通路药物聚肌胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid ，Poly I：C）对局灶性脑缺血损伤小鼠是否有保护作用，并探讨保护作用是否与抑制炎性作用有关。方法对小鼠进行一次性肌肉注射0.3 mg／kg Poly I：C ，24 h后进行左侧大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion ，MCAO），栓塞2 h后进行再灌注6、12、22 h ，诱导小鼠的脑缺血再灌注损伤模型，T TC染色方法测定脑缺血体积；Western blot方法检测缺血侧脑组织TRIF蛋白表达；ELISA方法检测小鼠缺血侧半脑脑组织炎性因子干扰素‐β（interferon‐β，IFN‐β）、白细胞介素‐10（interleukin‐10，IL‐10）、白细胞介素‐6（interleukin‐6，IL‐6）、肿瘤坏死因子‐α（tumor necrosis factor‐α，TNF‐α）的含量。结果缺血2 h再灌注6、12、22 h的小鼠出现明显的神经缺陷症状及脑组织梗死，在缺血再灌注各个时间点，小鼠缺血侧脑组织中IL‐6、TNF‐α表达均升高。0.3 mg／kg Poly I：C能减少梗死面积，改善神经缺陷，提高小鼠缺血侧脑组织 TRIF蛋白的表达，能在不同时间点升高IFN‐β水平并降低缺血再灌注缺血侧脑组织IL‐6和 TNF‐α的含量。结论0.3 mg／kg Poly I：C对脑缺血损伤小鼠有保护作用，保护作用机制与抑制小鼠脑缺血再灌注损伤过程中的炎症反应有关。
