人胎盘绒毛层粘连蛋白及其受体的定位与定量研究
摘要： 目的:研究层粘连蛋白(laminin, LN)及其受体(laminin receptor,LN-R)在早、中、晚期人胎盘绒毛的定位及其相对含量变化.方法:取早期、中期和晚期胎盘绒毛,常规制作石蜡组织切片,采用免疫组织化学ABC法和图像分析技术进行LN及LN-R定位和定量测定.结果:LN阳性反应主要位于绒毛上皮基膜和绒毛血管内皮基膜;LN-R的阳性反应位于绒毛上皮合体滋养层表面及合体滋养层和细胞滋养层的细胞质内,细胞核呈阴性.LN及LN-R的含量以早期胎盘绒毛中高,中期及晚期含量明显降低.结论:人胎盘绒毛含有LN及LN-R,随着胎盘周龄的增加,二者的含量均降低.
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中国城镇居民5种慢性疾病的经济负担和经济风险
目的:为中国相关医疗保险及卫生政策的制定提供合理的参考依据.方法:使用2007年11月至2011年11月的城镇居民基本医疗保险试点评估入户调查数据,运用二步模型法和人力资本法估算中国城镇居民5种主要慢性疾病的经济负担,进一步根据慢病患者的疾病经济负担计算相对经济风险度(relative risk,RR)和校正RR值,比较不同慢病患者相对慢性病全人群的疾病经济风险大小,5种主要慢性病包括高血压、心血管疾病、糖尿病、性肺部疾病、关节炎或风湿病.结果:5种主要慢性病患者中50％以上都为65岁以上的离退休人员.除慢性肺部疾病患者的医疗保险覆盖率不足90％以外,其他几种慢性病都在90％以上.这5类慢性病的门诊及药店购药的次均自付费用比例都在60％以上,次均住院自付费用比例都在50％左右.城镇居民主要慢性病中年人均疾病经济负担高的是心血管疾病患者,为8 954.29元,其次是糖尿病患者,为8 914.36元.心血管疾病和糖尿病患者的校正RR值要大于1,分别为1.36和1.15.结论:城镇居民主要慢病患者中退休老年人所占的比例大,西北部地区这5类慢病的患病情况严重.经济负担主要来自门诊和药店,报销用药的可及性需要进一步提高.主要慢病中疾病经济负担和经济风险较大的都为心血管疾病和糖尿病患者.
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抗c-mpl抗体在系统性红斑狼疮并发血小板减少中的作用
目的:分析抗血小板生成素( thrombopoietin,TPO)受体(c-mpl)抗体在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)血小板减少中的作用,探讨该抗体的致病机制及临床价值.方法:应用间接ELISA法检测24例伴血小板减少SLE患者(A组)、27例曾有血小板减少现已恢复正常SLE患者(B组)、18例无血小板减少SLE患者(C组)及18例正常对照者血清中抗c-mpl抗体、TPO水平,分析其与临床表现及SLE疾病活动性指数(SLE disease activity index,SLEDAI)之间的关系.结果:血清抗c-mpl抗体在SLE总的阳性率为18.8％,抗c-mpl抗体在A组、B组和C组中的阳性率差异无统计学意义(P=0.600).抗c-mpl抗体阳性组血小板计数明显低于阴性组(P=0.025),血清TPO水平明显高于阴性组(P =0.038),抗c-mpl抗体阳性与阴性组补体C3和C4、红细胞沉降率(erytrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)及抗核抗体(anti-nuclear antibody,ANA)、抗双链DNA抗体(anti double-strained DNA,dsDNA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)阳性率、SLEDAI评分差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:抗c-mpl抗体可能通过与TPO竞争结合c-mpl,阻断TPO-c-mpl通路,引起巨核细胞分化、发育、成熟障碍,从而引起血小板减少.
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紫外线照射对DNA修复基因RAD24转录的影响
目的:紫外损伤对DNA修复基因RAD24转录的影响.方法:以酿酒酵母HY684为实验对象,用波长254 nm紫外线分别在0、37、50和70 J/m2等强度下照射不同时间,提取总RNA,应用Northern杂交方法检测RAD24基因转录水平的变化.结果:37 J/m2及50 J/m2分别照射20～120 min明显提高RAD24基因转录水平.结论:低剂量紫外线照射可提高RAD24基因转录水平,该基因的表达具有损伤诱导性.
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HBx诱导p16INK4a高甲基化在Chang细胞株恶性转化倾向中的作用
目的:探讨乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对p16INK4a表达和甲基化的影响,以及其在肝细胞癌早期发生中的作用机制.方法:采用脂质体法将真核表达载体pcDNA3.1B-HBx和pcDNA3.1B质粒分别稳定转染Chang细胞,构建表达HBx的细胞株Chang-HBx和不表达HBx的细胞株Chang-vector;半定量RT-PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白质水平上检测Chang-HBx、Chang-vector和Chang细胞株中的p16INK4a表达；甲基化特异性PCR检测HBx对细胞中p16INK4a启动子甲基化的影响；CCK-8溶剂检测3种细胞株的增殖曲线,流式细胞仪观察3种细胞的细胞周期和细胞凋亡率,重复3次.结果:成功构建了Chang-HBx和Chang-vector稳定细胞株,Chang-HBx细胞生长速度增快,Chang-HBx细胞的S期平均比率明显高于Chang-vector细胞和Chang细胞(28.96％ vs.21.53％,P＜0.001; 28.96％ vs.21.5％,P＜0.001),而且Chang-HBx细胞的细胞凋亡率平均值明显低于Chang-vector细胞和Chang细胞(2.71％vs.3.69％,P＜0.001；2.71％ vs.3.36％,P＜0.001).初步机制研究证实HBx蛋白介导肝细胞的p16INK4a高甲基化,进而导致p16INK4a在mRNA和蛋白水平上表达均下降.结论:HBx通过诱导p16INK4a高甲基化下调后者的表达水平,可能在Chang细胞的恶性转化倾向中发挥作用.
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短时CaCl2刺激对人脂肪干细胞增殖与成骨向分化的影响
目的:观察CaCl2 溶液作为海藻酸钠/明胶交联剂短时作用于人脂肪间充质干细胞( human adipose-de-rived mesenchymal stem cells,hASCs)时,对其增殖和成骨向分化的影响,从而为后期三维生物打印实验选择合适浓度的CaCl2 溶液打下研究基础. 方法:取P3代hASCs,实验组分别用50、100、200、500 mmol/L的CaCl2 溶液对细胞处理5 min,对照组细胞不处理. P3代hASCs处理后第1、3、5、7天用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况. P3代hASCs成骨诱导7d后,采用碱性磷酸酶染色法观察细胞成骨向分化情况,并用碱性磷酸酶活性定量法测定各实验组与对照组碱性磷酸酶活性表达的差异. P3代hASCs成骨诱导14天后,用茜素红染色法观察细胞矿化结节形成情况进行定量分析. 采用SPSS 17. 0软件,运用单因素方差分析对结果进行分析,两两比较采用SNK法.结果:不同浓度CaCl2 溶液处理组细胞的增殖水平在第1、3、5、7天的差异均无统计学意义;成骨诱导7天后,随着CaCl2 溶液浓度的升高,碱性磷酸酶活性先升高后降低,除50 mmol/L与100 mmol/L CaCl2 溶液处理组之间,以及成骨诱导培养基组与200 mmol/L CaCl2 溶液处理组之间差异无统计学意义外,其余组间差异均有统计学意义( P<0. 05);成骨诱导14天后,随着CaCl2 溶液浓度的升高,矿化结节由散在片状逐步变为层叠片状,矿化结节定量结果显示各实验组之间以及与各对照组间的差异均有统计学意义(P<0. 05). 结论:短时高浓度钙离子刺激对hASCs增殖无影响,但对hASCs的成骨向分化有促进作用,且随着钙离子浓度增加,促进作用加强,因此可以选用高浓度CaCl2 溶液作为三维生物打印用材料的交联剂.
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HIV-1感染者外周血单个核细胞缺损病毒基因的研究
目的:研究HIV-1感染者缺损HIV-1 DNA的特性.方法:用长片段PCR法(LD-PCR)研究分析HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear, PBMCs)和体外培养感染淋巴细胞中HIV-1基因特征,使用位于HIV-1 DNA链两端的LTR(U5)、LTR(R)为引物,插入有全长HIV-1基因片段的大肠杆菌质粒PNL4-3等为标准对照,并对部分标本克隆测序.结果:经扩增9.1 kb是LD-PCR的主要产物,但在10例HIV-1感染者中有9例PBMCs检测出大小不一、范围较广的缺失HIV-1基因片段,经用基因探针杂交,发现近HIV-1基因中心部位缺失频率增加,缺失结合点常存在3～4个核苷酸短片段直接重复,体外培养中HIV-1基因缺损量减少,完整和缺失基因的存在与培养中病毒分离的时间密切相关.结论:HIV-1感染者PBMCs中存在大量HIV-1基因重组和缺损片段.
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可弯曲喉罩在颌面外科日间手术的应用
目的:探讨可弯曲喉罩在颌面外科日间手术全身麻醉治疗中应用的可行性、安全性. 方法:回顾性研究北京大学口腔医院口腔颌面外科门诊在全身麻醉治疗中应用可弯曲喉罩的日间手术病例40例( 3~61岁) ,其中男性19例,女性21例,均为美国麻醉医师协会( American Society of Anesthesiologists, ASA)分级Ⅰ~Ⅱ级. 术中监测不同时间点,即入室麻醉前(T0,基线值)、插入喉罩后即刻(T1)、手术切开时(T2)、术中15 min(T3)、术毕时(T4)5个时间点的患者生命体征指标,记录喉罩首次置入成功率及改为气管内插管的比例. 记录术中体动、低氧血症、呼吸道梗阻情况,记录手术时间、麻醉时间、术毕至拔除喉罩时间、拔除喉罩时体动、呛咳及术后24 h咽痛发生率. 术后24 h随访记录有无手术相关并发症(如出血、血肿、及术区神经损伤情况). 结果:40例患者均顺利完成手术,36例患者成功使用可弯曲喉罩(90%, 36/40),男性16例,女性20例,其中喉罩首次置入成功率80%(32/40),二次尝试成功率50%(4/8). 4例不成功的患者中,3例患者第二次尝试置入喉罩位置仍不理想,改为气管内插管方式;1例患者第二次尝试,喉罩虽顺利置入,但在手术开始前发现胃部胀气,改为气管内插管. 36例应用喉罩患者,平均手术时间(46. 58 ± 22. 57) min,平均麻醉时间(77. 97 ± 26. 82) min,术毕至拔除喉罩时间(8. 31 ± 3. 33)min. 术中患者均无明显体动,拔除喉罩时轻微体动者11. 11%(4/36例),均无呛咳. 术后24 h喉罩组咽痛发生率13. 89%(5/36例). 术后无手术治疗相关出血、血肿及术区神经损伤等严重并发症. 患者清醒状态下各生命体征基线值T0与麻醉后各时点的数值T1、T2、T3、T4比较,P<0. 01,差异有统计学意义. 心率在麻醉后各时点数值T1、T2、T3、T4两两比较,P>0. 05,差异无统计学意义. 收缩压与舒张压在麻醉后各时点数值两两比较,T1与T4,T2与T3,差异均无统计学意义(P>0. 05). 呼吸频率手术开始后各时点数值T2、T3 与T4 间两两比较,P>0. 05,差异无统计学意义. 结论:可弯曲喉罩作为一种新型的声门上人工气道方式,应用于颌面外科日间手术的全身麻醉中,具有手术安全性较高、对患者心血管系统影响小、术后并发症少的优点,在临床上应用安全、有效.
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肺结核患者治疗依从性评分系统的研究
目的:编制肺结核患者治疗依从性的评分系统.方法:采用现况调查研究对124名肺结核患者的治疗依从性及其影响因素进行调查,用Logistic回归模型筛选影响依从性的预测指标,根据模型参数对预测指标的取值进行量化评分,编制出治疗依从评分系统(adherence rating score,ARS),然后选择574例肺结核病例在治疗开始前按ARS评分划分为依从组(247例)与不依从组(327例),再将不依从组随机分为干预组(146例)和对照组(181例)两个亚组;干预组的干预措施是基于ARS的定制宣教资料,对照组为常规的结核病宣传资料.比较各组疗程第6个月的累积不依从率.结果:编制出的ARS共7个条目,内容涵盖结核病的知识、态度和行为(KAP),以及患者的生活习惯与社会支持等多个维度;依从者和不依从者的ARS评分(均数±标准差)分别为:2.38±0.18和4.69±0.20,两者差异有统计学意义(t=8.52,P＜0.01).在随机对照试验中,干预组和对照组6个月的累积不依从率分别为:24.7%和41.4%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);而干预组和依从组6个月的累积不依从率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:ARS评分系统具有较好的效度和信度,可以用于肺结核患者治疗依从性的测评.
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克罗恩病的诊疗现状及临床、病理特点
目的:评价克罗恩病的诊疗现状,总结其临床、病理特点及治疗转归.方法:回顾性分析220例炎症性肠病住院患者中48例克罗恩病的病历资料,详细记录临床表现、实验室检查、X线和内镜、病理及治疗情况.结果:1987年至1995年共诊断克罗恩病4例,1995年后诊断44例.克罗恩病高峰发病年龄为17～40岁,占75.0%(36/48);30岁以下发病者占43.8%(21/48).临床主要表现为腹痛、腹泻和便血;伴肠道外表现16例(33.3%),伴有肛周疾病3例(6.3%),肠瘘2例(4.2%).内镜诊断符合率85.7%(36/42),表现为节段性病变,溃疡形成、肠管狭窄和卵石征.X线诊断符合率为84.2%(32/38),主要表现为龛影、肠管狭窄及卵石征.病理非干酪性上皮样肉芽肿总检出率为43.2%(19/44).90%(27/30)经药物治疗症状改善,有13例行手术治疗.结论:近10年来克罗恩病诊断例数明显增加.内镜+病理+X线造影检查是诊断克罗恩病的主要手段.小肠镜、胶囊内镜及多次病理检查、随访有助于提高诊断率.
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酮洛芬β-CD包合物制剂的药效学评价
目的:考察酮洛芬经β-CD包合后制成的速溶颗粒剂在动物体内的解热、镇痛及抗炎效果并和酮洛芬单体的药效比较.方法:分别制备动物解热、镇痛及抗炎模型,将酮洛芬β-CD包合物制剂用5g*L-1 CMC-Na研磨成适当浓度混悬液,灌胃给药,并以酮洛芬单体的5g*L-1 CMC-Na混悬液为阳性对照和以5g*L-1 CMC-Na混悬液为空白对照,分别研究其解热、镇痛及抗炎效果.结果:酮洛芬β-CD包合物制剂可明显降低酵母所致家兔的发热反应,大抑制率可达88.0%,持续5h以上;对乙酸诱导的小鼠痛反应有显著的抑制作用,在第10分时,受试组小鼠的扭体次数明显低于同剂量阳性对照组;对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀有显著的抑制作用,与阳性对照组比较,受试组的早期作用更强,起效更快.结论:酮洛芬β-CD包合物制成的速溶颗粒剂,与酮洛芬单体相比,起效快、早期作用更强.
