多重巢式聚合酶链反应在疟疾混合感染检测与分型中的应用
摘要： 目的：应用能够同时检测恶性疟（ P.falciparum）、间日疟（ P.vivax）、卵形疟（ P.ovale）、三日疟（ P.malarie）及其混合感染的多重巢式PCR方法，对疑似疟疾混合感染样本进行检测，评价其在疟原虫混合感染及分型中的应用价值，旨在为疟疾流行病学调查、疟疾混合感染的确诊提供一种快速高效、特异性强、灵敏度高的实验室诊断方法，为传统的镜检法提供有效的补充。方法：根据恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的18 SSU rRNA基因序列设计5对引物（1对通用引物、4对特异性引物），以等比例混合的4种疟原虫核酸为模板，建立疟疾多重巢式PCR检测方法，并应用该法对28份疑似疟疾混合感染样本进行检测及测序验证，将其结果与镜检法比较。结果：28份疑似混合感染样本中混合感染样品数为6例，其中恶性疟和间日疟混合感染样品5例，恶性疟和卵形疟混合感染样品1例。结论：本研究建立的多重巢式PCR检测方法能够同时用于恶性疟、间日疟、卵形疟、三日疟及其混合感染样本的检测，在疟疾混合感染的确诊与分型上较镜检法有明显的优势和更高的应用价值。
-
烧伤患者肢体Ⅲ度创面组织恢复过程中EPO、TGFβ1及受体表达
目的:考察烧伤患者肢体Ⅲ度创面组织恢复过程中促红细胞生成激素(EPO)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及受体表达.方法:选择2014年5月至2017年12月在我院收治的106例单个肢体Ⅲ度烧伤患者为研究对象.愈合时间为2.0～9.5周,中位数6.0周,以所有患者的愈合时间的中位数为界,分为2组,愈合快组和愈合慢组,各53例.结果:两组随着时间的延长均有不同程度地愈合(P<0.05),与愈合慢组比,愈合快组每周的愈合面积均较高(P<0.05).除了愈合时间,两组患者的性别、年龄、烧伤原因、手术距离烧伤后的时间、患肢、高血压、高血脂、其他心脑血管疾病及0周时烧伤组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII表达差异均无统计学差异(P>0.05),与愈合慢组比,愈合快组的年龄、糖尿病例数、烧伤面积和手术面积较少,4周时烧伤组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII较高(P<0.05),以愈合快慢为因变量,以年龄、糖尿病例数、烧伤面积、手术面积、4周时烧伤组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII为自变量,进行Logistic回归分析,年龄、4周时烧伤组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII可影响肢体Ⅲ度创面组织愈合,年龄越小,4周时烧伤组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII表达越高,肢体Ⅲ度创面组织愈合越快(P<0.05).两组创面组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII 0周的表达相当(P>0.05),到2周时,EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII均增高(P<0.05),到4周时,EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII均降低(P<0.05),与愈合慢组比,愈合快组2周和4周的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII均明显增高(P<0.05).结论:肢体Ⅲ度创面组织的EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII表达与愈合明显相关,EPO、EPO受体、TGF-β1、TβRI及TβRII表达较高,创伤愈合较快.
-
二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞增殖抑制作用及其机制
目的:探讨二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞增殖抑制作用及其机制.方法:将人乳腺癌细胞MCF-7分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、二甲双胍组+紫杉醇联合组,MTT法检测各组人乳腺癌细胞MCF-7活力,实时荧光定量逆转录法测定miR-34 a的表达水平,酶联免疫吸附法测定Ki-67、cyc D1、β-cate-nin、VEGF蛋白水平.结果:(1)二甲双胍组、紫杉醇组、联合组的OD值、存活率均低于对照组(P<0.05);联合组OD值、存活率低于二甲双胍组、紫杉醇组(P<0.05);二甲双胍组OD值、存活率与紫杉醇组比较无明显差异(P>0.05);(2)二甲双胍组、紫杉醇组、联合组miR-34a表达水平均高于对照组(P<0.05);联合组miR-34 a表达水平高于二甲双胍组、紫杉醇组(P<0.05);二甲双胍组miR-34 a表达水平与紫杉醇组比较无明显差异(P>0.05);(3)二甲双胍组、紫杉醇组、联合组Ki-67、cyc D1、β-catenin、VEGF蛋白水平均低于对照组(P<0.05);联合组Ki-67、cyc D1、β-catenin、VEGF蛋白水平低于二甲双胍组、紫杉醇组(P<0.05);二甲双胍组Ki-67、cyc D1、β-catenin、VEGF蛋白水平与紫杉醇组比较无明显差异(P>0.05);miR-34 a表达水平与存活率、Ki-67、cyc D1、β-catenin、VEGF蛋白呈明显负相关关系(P<0.05).结论:二甲双胍与紫杉醇组联合作用能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移,其机制与miR-34 a介导抑制细胞周期、Wnt-β-catenin信号通路、VEGF有关.
-
ACS患者外周血中vWF-cp、CatK、CysC及P选择素的变化及与冠脉病变的关系
目的:探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)、组织蛋白酶K(Cat K)、胱抑素C(CysC)及P选择素的变化及其临床意义.方法:选取我院心内科确诊的ACS患者90例(ACS组)、稳定性心绞痛患者90例(SAP组)及体检健康对象90例(对照组),收集时间2016年1月至2017年7月,检测三组的血清vWF、Cat K、CysC、P选择素水平,并分析上述指标与ACS患者冠脉病变支数、冠脉Gensini积分的关系.结果:ACS组、SAP组的血清Cat K、CysC、P选择素水平均显著高于对照组(P<0.05),vWF-cp显著低于对照组(P<0.05);ACS组的血清Cat K、CysC、P选择素水平显著高于SAP组(P<0.05),vWF-cp显著低于SAP组(P<0.05);单支、双支及三支病变患者的血清Cat K、CysC、P选择素水平在组间逐渐升高(P<0.05),vWF-cp在组间逐渐降低(P<0.05);ACS患者血清Cat K、CysC、P选择素与Gensini评分呈显著正相关(P<0.05),vWF-cp与Gensini评分呈显著负相关(P<0.05).结论:ACS患者血清Cat K、CysC、P选择素显著的升高、vWF-cp水平显著降低,并且与冠脉病变程度具有密切关系.
关键词： 急性冠脉综合征 血管性血友病因子裂解酶 组织蛋白酶k 胱抑素C P选择素 -
同型半胱氨酸水平与缺血性脑卒中的相关性研究
目的:探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与缺血性脑卒之间的关系.方法:分别测定140例缺血性脑卒中患者、100例健康对照者血浆Hcy浓度.结果:缺血性脑卒中患者血浆Hcy水平明显高于健康对照组(P<0.01),其中中青年患者血浆Hcy水平又高于老年患者(P<0.01);缺血性脑卒中不同亚型血浆Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:血浆高Hcy血症(Hyperhomocysteinaemia,HHcy)是缺血性脑卒中重要危险因素,尤对中青年缺血性脑卒中组的影响为显著,血浆Hcy水平与不同脑卒中亚型无相关性.
-
AMD3100对胆管癌CXCR4基因、蛋白表达及QBC939细胞增殖能力的影响
目的:探讨CXCR4基因在胆管癌组织标本及人胆管癌细胞株QBC939中的表达情况,分析AMD3100应用对CXCR4基因表达及QBC939细胞的生物学行为变化.方法:收集人胆管癌组织标本,培养人胆管癌细胞株QBC939,加入不同浓度的AMD3100抑制剂.采用RT-PCR和Western blot方法,分别检测人胆管癌标本及转染AMD3100抑制剂前后QBC939胆管癌细胞株中CXCR4基因和蛋白的表达.应用CCK-8试剂盒对转染后细胞增殖活性进行检测.通过克隆形成实验观察AMD3100对细胞克隆形成的抑制.结果:CXCR4基因及其蛋白在胆管癌组织标本及人胆管癌细胞株QBC939中均高度表达.不同浓度AMD3100抑制剂对QBC939胆管癌细胞株的增殖抑制活性取决于AMD3100抑制剂的孵育浓度、孵育时间.其中,转染不同浓度抑制剂24 h,并未对细胞增殖造成影响;转染48 h后,0.1μg·ml-1 AMD3100无明显影响,1μg·ml-1、5μg·ml-1的AMD3100抑制剂明显抑制了细胞的增殖;转染72 h后,各浓度均对细胞增殖有明显抑制作用.克隆形成实验分析显示,抑制CXCR4基因表达明显延长了克隆体形成时间,使克隆体体积和数目减少.结论:AMD3100抑制剂影响人胆管癌细胞株QBC939的增殖能力,抑制CXCR4基因和蛋白的表达.
-
糖化血红蛋白快速诊断试纸研究
目的:设计并构建两种糖化血红蛋白快速诊断试纸,比较两种不同原理的快速诊断试纸检测糖化血红蛋白(HbA1c)的性能.方法:设计并构建了一种侧向亲和层析试纸,根据检测线上HbA1c的颜色实现半定量检测.构建了一种荧光免疫层析试纸(FICTS),利用荧光免疫定量分析仪实现HbA1c定量检测.针对HbA1c临床样本,对两种快速诊断试纸进行相关性能分析.结果:亲和层析试纸检测流程满足床旁诊断(POCT)的需求,但半定量的HbA1c检测结果完全无法实现准确的HbA1c检测.HbA1c荧光免疫层析试纸保证了良好的准确度、线性度(R2>0.99)、变异系数(CV<10％)和区分度,和临床比对结果十分优异(R2>0.95),且HbA1c检测结果不受高浓度糖类和表面活性剂的影响.结论:相比于亲和层析试纸,FICTS是一种较为优秀的HbA1c快速诊断试纸,这种试纸操作简便,有良好的线性度、准确度,能良好区分HbA1c阴阳性样本,并且与临床高效液相色谱法(HPLC)的检测结果一致.
-
重度颈动脉狭窄模型大鼠致认知功能障碍的机制探讨
目的:探讨重度颈动脉狭窄致认知功能障碍大鼠模型在中枢神经和免疫功能方面的机制.方法:40只SD大鼠随机分为对照组和手术组.通过部分阻断两侧颈动脉构建重度颈动脉狭窄大鼠模型.分别于术后1、3、7 d采用Morris水迷宫实验验证认知功能障碍的诱导结果.使用ELISA检测大鼠脑组织中IL-1β、TNF-α炎性因子的表达,RT-PCR检测大鼠脑组织中TLR4、CD200的mRNA表达,TUNEL法检测大鼠脑组织的细胞凋亡情况.结果:大鼠颈动脉狭窄手术造模完成后1、3、7 d,大鼠的逃避潜伏期显著延长(F=164.800,P=0.000),穿越平台次数显著降低(F=64.430,P=0.000).手术组大鼠在术后3 d,脑组织中的IL-1β(126.33±20.06 pg·mg-1)和TNF-α(119.88±17.31 pg·mg-1)炎性因子显著高于对照组脑组织中的IL-1β(38.25±7.73 pg·mg-1)和TNF-α(49.65±9.11 pg·mg-1)(IL-1β:t=18.320,P=0.000;TNF-α:t=16.060,P=0.000).手术组大鼠在术后3 d,脑组织中的TLR4 mRNA(1.69±0.06)的表达水平显著高于对照组(1.00±0.04)(t=10.140,P=0.000).手术组大鼠在术后3 d,脑组织中的CD200 mRNA(0.83±0.05)的表达水平显著低于对照组(1.00±0.04)(t=2.680,P=0.028).手术组大鼠在术后3 d的脑组织冰冻切片TUNEL染色强于对照组.结论:TLR4、CD200介导的免疫反应和中枢神经细胞凋亡可能参与颈动脉狭窄导致认知功能障碍的发病机制.
-
一种新型三轴调节式精准穿刺定位器在椎间孔镜穿刺定位的临床应用
目的:设计一种新型三轴调节式精准脊柱穿刺定位器,阐述其设计原理及方法,探索其辅助经皮椎间孔镜穿刺定位的临床应用价值.方法:研制一种新型三轴调节式脊柱穿刺定位器,辅助椎间孔镜穿刺定位.选取2016年1月—2017年6月接受椎间孔镜手术治疗的64例腰椎间盘突出症患者,随机将患者均分为两组,即新型三轴调节式精准脊柱穿刺定位器辅助组(辅助组)与采用传统C型臂X线机透视下完成穿刺定位的传统组(传统组).比较两组患者术中透视次数、穿刺次数、穿刺时间以及术前、术后1d、术后3个月、术后6个月VAS评分和手术并发症差异.结果:平均透视次数辅助组为(7.4±1.7)次,传统组为(18.4±3.8)次,两组差异有统计学意义(P<0.05).平均穿刺次数辅助组为(1.4±0.4)次,传统组为(8.3±4.3)次,两组差异有统计学意义(P<0.05).平均穿刺时间辅助组为(6.36±3.08)min,传统组为(24.54±6.72)min,两组差异有统计学意义(P<0.05).术前、术后1 d、术后3个月、术后6个月VAS评分,辅助组分别为(7.8±2.1)、(2.1±0.9)、(1.7±0.6)、(1.3±0.4)分,传统组分别为(7.9±1.9)、(2.3±1.0)、(1.8±0.4)、(1.5±0.3)分,两组患者术后VAS评分较术前均明显降低(P<0.05),术后两组患者同一时间点VAS评分差异无统计学意义(P>0.05).传统组有1例患者术中穿刺过程中出现一过性下肢疼痛、麻木加剧,调整穿刺方向后症状缓解,术后无根性疼痛症状残留.有1例患者术后1月余复发,后行开放手术治疗.辅助组患者无相关并发症发生.两组患者并发症差异无统计学意义(P>0.05).结论:新型三轴调节式精准脊柱穿刺定位器辅助穿刺定位,可以明显提高穿刺准确率,减少穿刺次数及时间,并发症发生率低,有效改善患者症状,临床疗效确切.
-
术前尿微量白蛋白/尿肌酐比值与造影剂肾病的相关性研究
目的:探讨术前尿微量白蛋白/尿肌酐比值水平(UACR)对早期发现冠状动脉造影/介入治疗术后造影剂肾病(CIN)的预测价值.方法:收集2016年11月至2017年9月期间于东南大学附属中大医院心血管内科住院择期行冠状动脉造影/介入治疗的180名患者的基线资料,根据术前UACR水平将患者分为高UACR组(UACR≥30,n=35例)和对照组(UACR<30,n=145例).根据是否发生CIN分为CIN组(n=32例)和非CIN组(n=148例).采用多因素Logistic回归分析术后发生造影剂肾病的危险因素.结果:180例患者中有32例发生造影剂肾病,发生率为17.78％.高UACR组发生CIN的比例显著高于对照组(P<0.001).CIN组患者中高UACR的比例显著高于非CIN组(P<0.001).多因素Logistic回归分析显示,术前UACR水平(P<0.001,95％CI:3.819～29.223,OR:10.564)是发生CIN的独立危险因素.结论:术前UACR水平可成为早期诊断造影剂肾病的独立预测因子.
关键词： 造影剂肾病 尿微量白蛋白/尿肌酐比值 冠状动脉造影 冠状动脉介入治疗 早期诊断 -
急性冠脉综合征患者血清磷脂转运蛋白活性与N末端脑钠肽前体水平的 相关性及预后意义
目的:分析急性冠脉综合征(ACS)患者血清磷脂转运蛋白(PLTP)活性与N末端脑钠肽前体(NT-proB-NP)水平的相关性及预后意义.方法:2014年至2016年期间,无锡市锡山人民医院心血管内科顺序入选ACS患者121例,测定PLTP活性和NT-proBNP水平、行心脏彩超及常规实验室检验,随访一年.结果:高NT-proB-NP水平患者PLTP活性明显高于低NT-proBNP水平患者,多重线性回归提示NT-proBNP水平与PLTP活性相关(Beta=0.214,P=0.014).左室收缩功能降低患者PLTP活性与NT-proBNP水平明显增高.Logistic回归分析提示高PLTP活性(OR=1.024,P=0.000)与高NT-proBNP水平(OR=1.000,P=0.027)是不良心脏事件的独立预测因子.ROC曲线显示高PLTP活性与高NT-proBNP水平预测不良心脏事件发生的曲线下面积分别为0.798与0.757.结论:ACS患者血清PLTP活性与NT-proBNP水平相关且能预测不良心脏事件的发生.
