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巨噬细胞炎性蛋白4的突变和原核表达

李树钧;戚好文;季少平;遆新宇;张英起;药立波

摘要: 目的探索如何抑制嗜酸细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行表达. 方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4 N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸. 以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因. 克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变. 将正确的基因插入到GST融合表达载体pGEX-4T中,以IPTG诱导表达. 结果 PCR产物为220 bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变. 构建的pGEX-4T融合表达载体在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约34 kU的新生融合蛋白表达. 结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因. SDS-PAGE表明,与GST融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础.

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