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丙型肝炎病毒ns5b基因的克隆、表达及鉴定

刘卫东;薛小平;雷迎峰;尹文;吕欣

摘要: 目的: 构建HCV ns5b基因的重组原核表达质粒,并获得NS5B蛋白的高效表达,为制备抗NS5B抗体及以其为靶位的抗HCV感染研究创造条件. 方法: 利用PCR技术扩增HCV ns5b基因,XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体pRSETA上,转化大肠杆菌JM109菌株,获得阳性重组质粒pRSETA-ns5b, 阳性质粒转化BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot电泳进行鉴定,并以薄层扫描分析对其定量. 结果: 成功构建了HCV NS5B蛋白表达载体pRSETA-ns5b,经诱导明显表达出6His-NS5B融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白25%,Western-Blot结果显示表达蛋白保持活性. 结论: HCV NS5B蛋白在体外得到了有效表达.

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