一种优化的DNA家族改组方法
摘要： 目的:优化DNA家族改组方法,增加改组分子库的多样性.方法:以人、猴、兔的BPI23基因为模板,首先将3种基因的PCR产物等量混合后用DNaseⅠ消化,回收50bp左右的片段,再经过无引物和有引物两步PCR反应获得与原基因大小相同的改组分子,将其与载体连接获得改组分子库.随机挑取4个克隆测序观察改组效果.结果:4个克隆均为3种模板基因片段的杂合体,其中3个克隆还包含氨基酸点突变,表明改组分子库多样性较大,改组方法较为成功.结论:该方法的建立为进一步筛选高活性的BPI23分子打下基础,并为改组其他基因家族提供了借鉴.
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人源5-羟色胺转运体稳定表达细胞系的建立及其功能探究
目的 建立人源5-羟色胺转运体(human serotonin transporter,hSERT)稳定表达细胞系,并对细胞系hSERT的结合活性和重摄取功能进行初步研究.方法采用脂质体转染法将hSERT转染于母细胞,即人胚胎肾(human embryo kidney,HEK)293细胞,应用抗生素G418(800 μg/ml)压力筛选,并采用RT-PCR和Western印迹法在基因和蛋白水平对HEK293-hSERT细胞系进行鉴定和稳定性验证;采用放射性配体结合实验检测其与氚标西酞普兰([3H]-citalopram)的结合活性,并检测其对[3H]5-HT的重摄取功能.结果 RT-PCR和Western印迹结果表明,所建立的HEK293-hSERT细胞系在15代内(P1,P5,P10,P15)均稳定表达hSERT;放射配体结合实验表明,HEK293-hSERT细胞系与[3H]-西酞普兰具有明显的特异性结合;并且在100 nmol/L [3H]5-HT条件下,具有明显的5-HT重摄取功能,这一作用可被10 μmol/L的氟西汀所阻断,而母细胞HEK293无此功能.结论 本研究所建立的HEK293-hSERT细胞系可稳定表达SERT,并且具有内源性SERT的结合和重摄取功能,是一种稳定表达功能性hSERT的细胞系.
关键词： 5-羟色胺转运体(SERT) HEK293 抗抑郁药 5-HT 细胞转染 -
透膜肽修饰的载流感泰得PLGA纳米粒的制备与评价
目的：制备与评价包载反义核酸药物-流感泰得的透膜肽修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly（D，L-lactic-co-glycolic acid ），PLGA]纳米粒。方法通过固相多肽合成法合成透膜肽（ trans-activating transcriptional acti-vator，TAT），使用高效液相色谱及质谱仪检测其纯度及相对分子质量。用TAT修饰PLGA后，采用双重乳化挥发溶剂法制备包载流感泰得的新型纳米粒，并对纳米粒进行理化分析和体外缓释效果评价，主要指标有：粒径、分散系数、Zeta电位、表面形态、载药量及体外释放。 Cell Count Kit-8（CCK-8）实验评价TAT-PLGA纳米粒的细胞毒性。结果合成的TAT纯度为95．6％，相对分子质量为1495．8，TAT修饰PLGA后所制备的纳米粒粒径为（159．5±2．1） nm，Zeta电位为-（1．87±0．6）mV，载药量为（5．75±0．17）μg/mg。在扫描电子显微镜下观察纳米粒形态为圆形，表面光滑，粒径分布均匀。体外释放实验结果显示TAT修饰的PLGA纳米粒包封的流感泰得具有缓释作用。细胞毒性实验结果显示，TAT修饰的PLGA纳米粒对细胞体外生长无不良影响，细胞相容性良好。结论通过固相多肽合成法成功合成了TAT，并成功使用双重乳化溶剂挥发法制备了TAT修饰的PLGA纳米粒，在流感预防与治疗方面具有潜在应用前景。
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青藏公路沿线生活饮用水卫生学检测及风险评估
目的 通过对青藏公路沿线生活饮用水的卫生学检测分析和风险评估,了解掌握饮用水卫生状况,为饮用水安全管理工作提供科学依据和技术支撑.方法 现场查看水源基本情况并收集水样56份,按照国标方法对样品的理化和微生物学指标进行检测评价,并对危害因素进行风险评估.结果 所检测的56份水样总合格率为75.0%;在不合格水样中,总大肠菌群、菌落总数、硫酸盐和浑浊度均超标为7份(12.5%),其次是氯化物超标6份(10.7%);在检测水样的超标项目中,总大肠菌群、菌落总数、浑浊度以及硫酸盐超标次数多,每项分别占总超标次数的13.2%;不同水源类型之间合格率无明显差异;影响青藏公路沿线生活饮用水的主要风险因素为总大肠菌群、菌落总数、浑浊度、氯化物和硫酸盐.结论 青藏公路沿线生活饮用水水质卫生合格率偏低,微生物和氯化物是主要风险因素,应加强水质消毒并完善水处理措施,保障青藏公路沿线村民生活饮用水的安全.
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马齿苋水提取物平喘作用与β受体和M受体的关系
目的：观察马齿苋水提取物（ water extract of Portulaca oleracea L， WEPO）平喘作用与β和M受体的关系，探讨其平喘作用机制。方法选用体质量2．0～2．5 kg家兔，制备离体气管环。以气管平滑肌收缩频率、幅度为指标，观察WEPO对气管平滑肌活力的影响。以氨茶碱（ Ami）为阳性对照药，以普萘洛尔（ Pro）为β受体阻断剂，观察WEPO平喘作用与β受体的关系，以氯乙酰胆碱（ AChCl）为M受体激动剂、阿托品（ Atr）为M受体阻断剂，观察WEPO平喘作用与M受体的关系。结果①WEPO各剂量组药后家兔离体气管平滑肌收缩频率、幅度均显著低于药前（ P＜0．05，＜0．01）。②Pro＋WEPO组药后气管平滑肌收缩频率、幅度显著高于WEPO组，二者比较差异有统计学意义（P＜0．01）。③AChCl组药后气管平滑肌收缩频率、幅度均显著高于药前（P＜0．01）。④WEPO＋AChCl组药后气管平滑肌收缩频率、幅度与AChCl组药后比较差异无统计学意义（P＞0．05）。⑤Atr＋WEPO组药后上述指标与WEPO组药后比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 WEPO平喘作用与松弛气管平滑肌有关，兴奋β受体是其松弛气管平滑肌作用机制之一，与M受体无关。
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“三防”医学救援队组织指挥模拟训练导调系统的设计与实现
目的 研发“三防”医学救援队组织指挥模拟训练导调系统,实现训练进程的自动控制,确保模拟训练的顺利实施.方法 分析导调系统的业务需求,并采用接口关系图、功能结构图、程序流程图、状态图等分析与设计方法对训练计划生成与合理性检查、训练计划调整、训练状态控制、训练信息定时发送、模拟时间计算等关键功能进行分析和设计,采用Borland Delphi 7.0进行程序实现,软件体系架构采用C/S模式.结果 基于上述方法实现了导调系统,实际应用证明该系统能够满足“三防”医学救援队组织指挥模拟训练导调的需要.结论 该文所采用的分析和设计方法可有效运用于导调系统的分析与设计.
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军队医院SCI论文合作网络分析
目的：基于军队137家医院2006～2012年发表的SCI论文，研究高发文量医院的机构合作与作者合作情况，为军队医院的研究方向和医院间的进一步合作提供参考。方法利用汤姆森路透公司开发的数据分析工具（ TDA），分析机构和作者共现以及作者和关键词共现与作者和学科共现，得到机构和作者合作情况。结果和结论军队医院2006～2012年的军内医院合作分为5种类型，以地域相近的合作为主，研究方向相同的合作为辅，军内医院合作随时间变化为以解放军总医院为主的合作圈随时间不断扩大，军内外医院的合作较多基于地域性相近、研究方向相近和机构间的从属关系；高发文作者间合作是基于课题组内作者合作，课题组外合作较少；利用作者对关键词的共现关系发现高发文作者间隐藏的竞争与合作关系以及竞争相对较弱的研究方向。
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广西1例HIV-1 G亚型毒株全长基因序列的测定和分析
目的 对广西1例HIV-1 G亚型毒株感染者体内病毒近似全长基因组进行序列测定并进行系统进化分析.方法 对前期鉴定的1例HIV-1G亚型毒株感染者进行背景信息收集,并采集其外周血,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术分两段扩增并测定病毒近似全长基因序列.利用MEGA6软件对全长序列进行系统进化分析.结果 获得了病毒近似全长基因组序列,长度为8847 bp.在系统进化树中,该毒株与G亚型参考株成簇,Bootstrap值为100%.系统溯源分析显示,该毒株与广西首次报道的G亚型JN106043毒株关系近(Bootstrap值为100%,基因离散率为5%).结论 该毒株可能是由广西毒株传播所致,提示G亚型毒株在广西地区可能存在一定的局部流行,需进一步监测.该毒株序列的测定和分析对于广西地区HIV流行状况分析具有重要意义.
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D-二聚体、脂蛋白和癌胚抗原联合检测在胃肠道恶性肿瘤诊断中的价值
目的：探讨联合检测D-二聚体、脂蛋白和癌胚抗原对恶性胃肠道肿瘤的诊断价值。方法选择胃肠道恶性肿瘤患者139例和健康体检者155例，采用胶乳增强免疫比浊法测定D-二聚体水平，直接法测定血清高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）和脂蛋白（a）[Lipoprotein（a），Lp （a）]水平，化学发光法测定血清癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）水平。应用SPSS13．0统计软件分析每种检测指标的敏感性、特异性，并找到合适的检测组合。结果胃肠道恶性肿瘤患者血清D-二聚体、LDL、LP（ a）水平明显高于健康体检者（P＜0．001），HDL水平明显低于健康体检者（P＜0．001）；D-二聚体诊断分界点为0．495μg/ml，敏感性为62．6％，特异性为86．5％；HDL诊断分界点为1．025 mmol/L，敏感性为72．7％，特异性为85．2％；LDL的诊断分界点为3．375 mmol/L，敏感性为54％，特异性为82．6％；LP（a）诊断分界点为27．3 mg/dl，诊断的敏感性为58．3％，特异性为87．1％；CEA诊断分界点为2．14 ng/ml，敏感性为59．7％，特异性为76．8％；HDL＋CEA的敏感性为77．7％，特异性为88．4％；D-二聚体＋HDL的敏感性为70．5％，特异性为96．1％；HDL＋LP（a）的敏感性为76．3％，特异性为93．5％；D-二聚体＋HDL＋LP（a）的敏感性为84．2％，特异性为92．3％；D-二聚体＋HDL＋CEA的敏感性为87．1％，特异性为85．8％；HDL＋LP（a）＋CEA的敏感性为85．6％，特异性为92．3％；D-二聚体＋HDL＋LP（a）＋CEA的敏感性为89．9％，特异性为92．3％。结论 D-二聚体和脂蛋白可以像CEA一样作为肿瘤标志物，其联合检测具有很高的敏感性和特异性，对恶性胃肠道肿瘤具有重要的诊断价值。
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PCR检定eNOS基因VNTR多态性
目的:建立eNOS基因VNTR多态性的PCR分析方法.方法:按eNOS基因VNTR位点侧翼序列设计引物,自健康献血者基因组DNA扩增VNTR片段,琼脂糖凝胶电泳分析扩增片段的长度和数目,鉴定VNTR基因型.结果与结论:在208名健康献血者中鉴定出6/5杂合、5/5纯合、5/4杂合和4/4纯合4种VNTR基因型;等位基因的分布频率与日本人相似,但与美国黑人存在显著差异.
关键词： 一氧化氮合酶 基因多态性 数目可变串联重复序列 -
含银海藻酸盐敷料理化性质及其抗菌性能的研究
目的：探索含银海藻酸盐敷料的理化性质、生物安全性及抗菌活性。方法通过扫描电子显微镜（ SEM ）等实验方法对含银离子海藻酸盐敷料进行形貌及理化特征分析；通过MTT法，检测敷料的生物安全性；结合体外抑菌实验，研究敷料的抗菌效果。结果与海藻酸钙敷料相比，3种不同含量的银离子敷料透气率无显著差异（P＞0．05）；银离子浓度越高，其溶胀比率越高，吸水能力越强，降解越慢；MTT结果显示，细胞毒性较低；体外抑菌实验证实，银离子敷料对革兰阳性、阴性菌均具有良好的抑菌作用，同时显示银离子浓度越高，其抑菌效果越好。结论含银海藻酸盐敷料具有良好的生物相容性和抗菌活性，在创面愈合治疗中具有潜在的应用前景。
