首页 > 文献资料
-
镉诱导OK细胞凋亡
镉在人体的半衰期长达20～30年,长期职业或环境接触可导致镉在人体组织的大量蓄积.镉在肾脏的蓄积,会影响肾近曲小管的功能,表现为低分子量蛋白质、氨基酸、钙、葡萄糖、尿酸、磷酸盐和酶等从尿中大量排出,以及肾近曲小管的酸化[1,2].这些损害已被大量研究所证实,同时开始从分子生物水平得到一定认识,镉致细胞凋亡就是其中一个方面.有研究表明镉在体外实验中可致人T细胞(T cellline)[3]、猪肾细胞(LLC-PK1 cells)[4]、转化人肾细胞(293cells)[5]发生凋亡,少量整体实验如大鼠肾近曲小管细胞发生凋亡[6].有些体外实验显示很低剂量的镉(10～20μmol/L)即可诱导细胞凋亡[4,5].凋亡是一种生理性的细胞死亡方式,具有特殊的生化和形态特征,许多哺乳动物细胞会发生凋亡[7].尽管凋亡可表现出很多特征性的细胞改变,如核固缩、DNA断片、特殊基因表达等,但是至今没有一项技术足以明确说明凋亡[8].末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记方法(TdT-mediated dUTP Nick-END Labelling,TUNEL)是一种凋亡检测方法,简单、精确、快速、无放射性,可在原位单个细胞水平或对细胞悬液进行检测.在该检测系统中,对凋亡细胞DNA断片用荧光标记,然后用荧光显微镜或流式细胞仪(flow cytometry)进行检测[8～10].本次实验使用TUNEL方法、DNA凝胶电泳和细胞形态改变来检测镉诱导的OK细胞(一种建立好的具有肾近曲小管特征的肾上皮细胞株)凋亡,以帮助进一步认识凋亡以及镉导致的肾近曲小管功能障碍.
关键词： 镉 凋亡 TUNEL方法 OK细胞 DNA琼脂糖凝胶电泳 -
野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡
目的 研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理.方法 SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片.结果 MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体.结论 TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用.
-
限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切条件的优化
目的：探讨KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切的优化条件。方法 KpnⅠ和EcoRⅠ不同的酶切体系，酶切含有上述两种限制性内切酶酶切位点的载体pEGFP-Ano2，DNA琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果，以获取KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切的优化条件。结果50μL酶切体系，KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切的适宜条件：首先在1×L缓冲液情况下，应用1μL KpnⅠ酶切1μg质粒1 h，再加入1×H缓冲液和0．01％BSA，应用1μL EcoRⅠ继续酶切1 h。结论获取KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切质粒的适宜条件，为今后应用KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切实验提供科学的参考依据。
关键词： KpnⅠ EcoRⅠ 双酶切 优化 DNA琼脂糖凝胶电泳 -
缺氧诱导离体心肌细胞凋亡的动物实验研究
目的:建立一种新的SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,以探讨心肌细胞缺氧损伤后的细胞凋亡及其时序分布特点.方法:SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组:对照组,缺氧12h组(I12h)、缺氧24h组(I4h),缺氧48h组(I48h)以及缺氧72h组(I72h).应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等多种手段检测心肌细胞凋亡的改变.结果:在本实验的心肌细胞缺氧模型中,流式细胞仪检测发现,心肌细胞缺氧后的细胞凋亡百分率迅速增高.琼脂糖凝胶电泳分析,心肌细胞在缺氧48h、72h时均出现了凋亡特异性的"梯状"电泳带.结论:本实验培养乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关,并可导致和在体心肌缺血相似的心肌损伤.细胞凋亡在心肌缺氧心肌细胞死亡中起重要作用.
关键词： 缺氧 鼠心肌细胞 流式细胞术 DNA琼脂糖凝胶电泳 心肌细胞凋亡 -
d-儿茶精抗肝细胞凋亡的实验研究
目的采用抗坏血酸和硫酸亚铁诱导肝细胞凋亡的实验模型,研究d-儿茶精对其肝细胞凋亡的作用.方法采用琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33342荧光染色的组织形态学观察、流式细胞术等方法.结果经d-儿茶精作用的模型肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳图谱有显著性变化,DNA分子的"梯状"图谱明显消失,其消失程度与d-儿荼精在反应体系中的浓度有关,浓度愈大消失愈明显.从形态学上观察到肝细胞核体积比单纯诱导组的稍大,核膜较清楚,染色体的裂解明显改善.流式细胞仪显示DNA直方图上G1峰左侧的凋亡峰明显降低.结论d-儿茶精具有抑制抗坏血酸和硫酸亚铁诱导肝细胞凋亡的作用.
关键词： d-儿茶精 肝细胞凋亡 DNA琼脂糖凝胶电泳 形态学观察 流式细胞术 -
连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF－7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用的观察
目的：研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF－7细胞增殖的抑制程度，AO／EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态，DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200～2667μg? mL －1内，连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF－7细胞的增殖有显著的抑制作用，其抑制作用随药物浓度的增加而增强，对MCF－7细胞增殖抑制率由10．50％增加到43．83％，与对照组比较呈显著差异性（P＜0．05vs正常组）。连花清瘟胶囊明显影响乳腺癌MCF－7细胞的染色质，发生固缩等凋亡形态的变化及细胞凋亡的 DNA梯带形状。结论连花清瘟胶囊具有抑制乳腺癌细胞增殖和诱导其凋亡的抗肿瘤的药理作用。
-
心血康抗血管内皮细胞凋亡的实验研究
目的采用血管紧张素Ⅱ(AangⅡ)诱导血管内皮细胞凋亡,探讨心血康对其所致内皮细胞凋亡的作用.方法在原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中,给予不同浓度的心血康作用2h后,再予AngⅡ作用18h诱导内皮细胞凋亡,采用透射电镜技术、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术等方法检测凋亡内皮细胞的超微结构、DNA梯形图和凋亡峰百分率.结果经AngⅡ作用过的血管内皮细胞透射电镜下可见凋亡小体;与AngⅡ诱导组相比,经DNA琼脂糖凝胶电泳有显著变化,DNA的梯状图谱消失,消失程度与心血康的浓度有关,浓度越大消失愈明显;流式细胞术显示DNA直方图上G1峰左侧的凋亡峰明显降低,凋亡百分率与诱导组相比,具有显著性差异(P<0.05).结论心血康有抑制AngⅡ诱导的血管内皮细胞凋亡的作用.
关键词： 心血康 内皮细胞凋亡 DNA琼脂糖凝胶电泳 流式细胞术 -
缺氧诱导乳鼠离体心肌细胞凋亡的实验研究
目的:旨在建立一种新的SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,探讨心肌细胞缺氧损伤后的细胞凋亡及其时序分布特点,并探讨缺氧损伤后的心肌细胞凋亡的可能机制.方法:SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组:对照组,缺氧12小时组(I12h)、缺氧24小时组(I24h),缺氧48小时组(I48h)以及缺氧72小时组(I72h).应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳、光镜等多种手段检测心肌细胞凋亡的改变.结果:在本实验的心肌细胞缺氧模型中,流式细胞仪检测发现,心肌细胞缺氧后的细胞凋亡百分率迅速增高.琼脂糖凝胶电泳分析,心肌细胞在缺氧48h、72h时均出现了凋亡特异性的"梯状"电泳带.结论:本实验培养乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关,并可导致和在体心肌缺血相似的心肌损伤.细胞凋亡在心肌缺氧心肌细胞死亡中起重要作用.
关键词： 缺氧 乳鼠心肌细胞 流式细胞术 DNA琼脂糖凝胶电泳 心肌细胞凋亡
