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应用胚胎干细胞试验对多菌灵胚胎毒性的初步评价
目的 应用胚胎干细胞(ESC)和胚胎干细胞试验(EST),初步评价多菌灵的胚胎毒性,并探讨可能的毒性机制.方法 应用Alarma Blue法检测多菌灵对ESC和3T3成纤维细胞活性的影响;未分化的ESC体外经悬滴、悬浮培养后用10-4 mol/L抗坏血酸诱导分化为具搏动能力的心肌细胞,暴露于不同浓度的多菌灵(0、1、2.5、5、10和20 nmol/L),在分化终点即第10天时获取分化细胞的RNA,并检测细胞多能性基因Oct4和心肌特异性基因α-MHC的相对表达量,计算多菌灵对ESC分化的半数抑制剂量.根据EST的评价标准,对多菌灵的胚胎毒性进行评价.结果 多菌灵对3T3细胞和ESC细胞的存活率随着多菌灵浓度的增加而显著降低,ESC对多菌灵毒性更敏感;1 nmol/L多菌灵使Oct4的表达量显著升高,而2.5、5、10和20 nmol/L多菌灵使Oct4的表达量显著降低;随着多菌灵浓度的增加,α-MHC基因表达量逐渐降低,呈剂量-效应关系.多菌灵经EST评价为强胚胎毒性化合物.结论 多菌灵具强胚胎毒性,其对ESC细胞活性及多能性基因影响显著可能是其作用的机制之一.
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ECVAM验证的生殖发育毒性测试替代方法及其改进
生殖发育毒性试验可用来评估化学物的暴露对生殖和发育过程的危害和风险,对其进行优选、筛查和标记.现有生殖发育毒性评价方法是根据大剂量动物毒性的阳性结果推断风险.随着动物福利3R原则的推进以及大量新化合物的涌现和待筛选,各种生殖发育毒性评价的替代方法应运而生[1-2].替代方法被认可和采纳需要有效性验证,现有生殖发育替代试验的验证工作主要是由欧洲替代方法验证中心(European Centre for the Validation of Alternative Method,ECVAM)完成的,到目前为止,通过验证的方法只有胚胎干细胞试验(Embryonic Stem Cell Test,EST)、微团检测法(Micromass,MM)和全胚胎培养技术(WholeEmbryo Culture, WEC) .
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中药生殖毒性研究思路和方法
中药生殖毒性研究是中药安全性研究的重要组成部分.与传统中医理论中妊娠禁忌不同,现代所说的中药生殖毒性不仅包括药物致流产、胎儿死亡,还包括药物对受胎能力、生殖系统、胚胎发育及胎仔出生后发育的潜在不良影响,以及药物诱导畸胎产生的可能性.目前的中药生殖毒性评价主要采用国内外新药临床前安全性评价指南推荐的三阶段生殖毒性试验.此外,全胚胎培养、胚胎干细胞试验等体外替代胚胎毒性评价方法也用于在中药胚胎毒性评价.本文结合传统中医药特点就现代中药生殖毒性研究进展和中药新药生殖毒性评价方法等内容进行综述.
关键词： 中药 三阶段生殖毒性试验 全胚胎培养试验 胚胎细胞微团培养试验 胚胎干细胞试验 -
胚胎干细胞试验预测胚胎毒性替代方法进展
小鼠胚胎干细胞试验(EST)是通过ECVAM正式验证的胚胎和发育毒性的动物试验替代方法.在新技术的推动下,多项优化的EST方法通过基因转染、利用人来源的干细胞、增加检测通量、组合检测终点、量化检测指标等方式,提高了EST方法预测胚胎毒性的科学相关性和检测效率.在整合测试策略的原则之下,经过大规模化学物质的前验证和标准化试验,新的EST方法可单独或作为组合试验的一部分可以应用于先导药物的研发和化学品的胚胎毒性预测及机制研究.
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中药生殖毒性体外实验研究进展
生殖毒性作为中药学重要研究内容之一,是中药安全性研究的重要组成部分.目前对中药生殖毒性研究评价主要采用国内外新药临床前安全性评价指南所推荐的三阶段试验,然而存在费用高、实验周期长等缺点.欧洲替代方法研究中心(ECVAM)所推荐的胚胎干细胞试验、胚胎细胞微团培养试验及全胚胎培养试验等体外替代试验已应用于中药生殖、胚胎毒性的研究.该文就中药单体或复方生殖毒性体外试验评价的现状,对体外替代试验方法及其优缺点、必要性等进行了讨论.
关键词： 中药 生殖毒性 胚胎干细胞试验 胚胎细胞微团培养试验 全胚胎培养试验
