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荧光微球时间分辨免疫层析技术定量检测甲胎蛋白的研究
目的 建立荧光微球时间分辨免疫层析技术检测血清中甲胎蛋白(AFP)的反应体系并对该法进行评价.方法 以包裹有Eu螯合物的荧光微球作为标记物,共价偶联抗AFP的单克隆抗体AC18#,将抗AFP单克隆抗体AC17#和羊抗鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜上分别作为检测线和质控线,制作免疫层析试纸条.结果 标准曲线经Log-LogB函数处理,检测AFP的线性范围为0.03～1 000 U/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为5.35％和8.94％,平均回收率为98.45％.该法检测100例健康人员的AFP水平为(2.04±1.92) U/ml,正常参考值为5.80 U/ml,与时间分辨免疫分析法(TRFIA)检测AFP有较好的相关性,r=0.978(P＜ 0.05).结论 本研究建立的荧光微球时间分辨免疫层析具有快速、灵敏、简便、经济、可单人份操作等优点,为检测AFP提供了一种高效的新途径,符合我国国情,便于临床推广.
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荧光微球体外标记大鼠BMSCs的初步研究
目的 通过检测荧光微球655(quantum dot 655,QD655)标记SD大鼠BMSCs的体外细胞毒性、细胞增殖、细胞贴附性以及标记率,探讨QD655标记BMSCs及其示踪的可行性. 方法 收集2周龄健康SD大鼠股骨和胫骨骨髓,贴壁培养BMSCs.取第3代BMSCs采用QD655标记作为实验组,以未标记BMSCs作为对照组,采用锥虫蓝拒染法检测细胞存活率,MTT法观察QD655对细胞增殖性的影响;取实验组BMSCs向成骨诱导分化培养2周,采用茜素红、ALP染色定性鉴定细胞成骨分化能力,实时荧光定量PCR鉴定标记对细胞成骨分化的影响;分别在标记后即刻、1、2、4、6周采用荧光显微镜动态检测实验组BMSCs阳性标记率;扫描电镜观察实验组细胞在胶原/生物活性玻璃复合材料上的贴附性. 结果实验组与对照组细胞存活率均>90%,比较差异无统计学意义(P>0.05);培养1、3、5、7、9 d,两组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05).实验组BMSCs经成骨诱导分化2周后,茜素红及ALP染色均呈阳性,实时荧光定量PCR检测实验组BMSCs的骨桥蛋白、骨钙素、Ⅰ型胶原、ALP、BMP-2 mRNA较对照组成倍数高表达.实验组BMSCs标记后即刻阳性标记率达96.50%±1.59%,随着标记时间延长标记率下降,标记后1、2、4、6周标记率分别为93.30%±1.51%、72.40%±2.90%、40.10%±3.60%、10.00%±1.70%,对照组各时间点阳性标记率均为0.扫描电镜观察示实验组标记后细胞和材料贴附良好. 结论 QD655对大鼠BMSCs标记时间长,标记率及安全性高,是一种良好标记物.
