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中药布鲁生调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在胶质母细胞瘤增殖、迁移和自噬中的作用
目的:探讨布鲁生调节PI 3 K-AKT-mTOR信号通路对胶质母细胞瘤增殖、迁移和自噬中的影响方法:将U 251胶质母细胞瘤细胞分为A、B、C、D四组,A组:作为对照,B组:布鲁生处理;C组:PI 3 K inhibitor处理;D组:布鲁生与PI 3 K inhibitor处理,MTT法检测U 251胶质母细胞瘤细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能力;RT-PCR法检测布鲁生对PI 3 K、AKT、mTOR mRNA的变化,Western blot检测PI 3 K、AKT、mTOR、LC 3-Ⅰ、LC 3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的变化.结果:B、C、D三组均显著抑制U 251胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移,但D组抑制效果更显著(P<0.05),B、C、D三组PI 3 K、AKT、mTOR mRNA和蛋白水平表达均下调,LC 3-Ⅰ、LC 3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA和蛋白水平表达均上调,且D组与B组和C组具有显著差异性(P<0.05).结论:布鲁生可通过抑PI 3 K/AKT/mTOR信号通路减弱胶质母细胞瘤增殖和迁移,并促进自噬.
关键词： 布鲁生 PI3K/AKT/mTOR通路 胶质母细胞瘤 自噬 迁移 -
布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的机制
目的 通过体外实验探讨布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的作用机制.方法 取人胶质瘤细胞系SHG-44培养18h,按布鲁生作用的不同浓度分组.0.125、0.25、0.5、1.0、1.5 mmol/L,作用的不同时间分组:12、24、48 h,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)计算细胞抑制率；吖啶橙(A0)/溴乙啶(EB)染色及流式细胞术检测细胞凋亡的变化；使用Westem印迹观察细胞BCL-2、BAX和COX-2蛋白表达的变化.结果 (1)利用MTT比色分析法,发现SHG-44细胞分别用含不同浓度布鲁生溶液培养12、24、48 h后,细胞增殖受到明显的抑制,且与浓度和时间呈正相关；(2)流式细胞仪分析结果显示,布鲁生主要使SHG-44细胞集中在晚期凋亡；(3)Western印迹凝胶电泳显示,0.25、0.5、l mmol/L浓度处理组作用24 h后,剂量性地降低SHG44细胞中COX-2、BCL-2蛋白的表达,而升高BAX蛋白的表达.结论 布鲁生能明显抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制了COX-2蛋白表达有关.
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布鲁生抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2表达的研究
背景与目的:布鲁生是中药马钱子有效成分之一,具有镇痛、抗炎和抑制血小板聚集等多种药理活性.鉴于该药物的细胞毒性,研究表明其具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用.本研究旨在观察布鲁生对人非小细胞肿痛细胞A549增殖与凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测布鲁生对A549细胞存活的影响;流式细胞仪、荧光显微镜法研究布鲁生对A549细胞凋亡的影响;酶联吸附法检测布鲁生对A549细胞释放PGE2的影响;RT-PCR法检测布鲁生对A549细胞COX-2 mRNA的影响;Western印迹法检测布鲁生对环氧化酶COX-2蛋白表达的影响:荧光素酶报告基因法检测布鲁生对COX-2转录活性的影响.结果:布鲁生能明显抑制A549细胞增殖,并旱剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;能抑制A549细胞中环氧化酶COX-2的表达与PGE2的释放.过度表达COX-2能抑制布鲁生诱导的细胞凋亡;COX-2 SiRNA处理细胞后能明显增强布鲁生诱导的A549细胞凋亡作用.布鲁生能显著性抑制COX-2的转录激活.结论:COX-2是布鲁生诱导细胞凋亡重要的靶蛋白.
