首页 > 文献资料
-
转录因子C/EBPβ对肝癌细胞SMMC-7721影响
目的 探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响.方法 设计C/EBP-β及eGFP、shRNA序列,装入pLKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Westem blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响.结果 沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8％,P＜0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3％,P＜0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P＜0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P＜0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P＜0.05).结论 沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用.
-
精子β-actin 下调对小鼠怀孕率影响的实验研究
目的:通过构建精子β-actin下调的小鼠模型探讨β-actin下调对小鼠精子活力及怀孕率的影响.方法:首先构建携带下调ACTB基因表达的shRNA序列的慢病毒载体.然后将昆明小鼠随机分为ACTB-RNAi-LV组(实验组)、5X-1-RNAi-LV组(空病毒对照组)、生理盐水组(空白对照组),每组雄性、雌性小鼠各20只,于雄鼠4周大时睾丸局部分别注射慢病毒载体、空病毒颗粒、生理盐水.饲养至性成熟后,将各组小鼠进行组内交配,观察各组雌鼠怀孕率并提取雄性小鼠精子进行real-time PCR、Western blot及精子活力的分析.结果:成功构建β-actin下调精子的小鼠模型;实验组与空病毒对照组、空白对照组相比,精子中β-actin的mRNA表达量、β-actin表达量、精子的活力均有所降低且有统计学意义(P均＜0.05),空病毒对照组与空白对照组之间无统计学差异(P＞0.05).结论:β-actin下调精子活力明显下降,同时导致雌鼠受孕率降低.
