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SMMC-7721肝癌细胞膜上β2糖蛋白Ⅰ受体的表达
目的:研究β2糖蛋白Ⅰ(β22 G P Ⅰ)与SMMC-7721肝细胞膜的相互作用过程,探讨乙型肝炎病毒(HBV)嗜肝性的发生机制.方法:采用荧光显微镜及流式细胞仪分析的方法,检测SMMC-7721、HL-60及SGC-7901三种细胞膜与FITC-β2GP Ⅰ相结合的情况以及二者的结合特性.结果:仅SMMC-7721细胞膜表面附有大量荧光,其余2种细胞无此现象.加FITC-β2GPⅠ 20μL时,SMMC-7721与FITC-β2GP Ⅰ的结合率为19%,明显高于FITC-β2GP Ⅰ与HL-60的结合率(1.7%)及与SGC-7901的结合率(1.9%)(P＜0.01).加FITC-β2GP Ⅰ 50 μL时,SMMC-7721与FITC-β2GP Ⅰ的结合率为20.8%,与20μL的结合率无差异(P＞0.05),说明SMMC-7721与FITC-β2GP Ⅰ的结合率不随FITC-β2GP Ⅰ量的增加而增高.结论:在SMMC-7721肝细胞膜表面存在能与人β2GP Ⅰ特异结合的蛋白.
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转录因子C/EBPβ对肝癌细胞SMMC-7721影响
目的 探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响.方法 设计C/EBP-β及eGFP、shRNA序列,装入pLKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Westem blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响.结果 沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8％,P＜0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3％,P＜0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P＜0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P＜0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P＜0.05).结论 沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用.
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8-溴-7-甲氧基白杨素和索拉非尼对肝癌干细胞样细胞凋亡的影响
背景：拟尝试结合8-溴-7-甲氧基白杨素和索拉非尼的优点扬长避短，弥补肝细胞癌肿瘤干细胞对索拉非尼的耐药，综合提高肝细胞癌的治疗效果。目的：观察8-溴-7-甲氧基白杨素和索拉非尼单用及二者联用对体外培养的 SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡的影响，并分析其作用机制。方法：8-溴-7-甲氧基白杨素、索拉非尼单用作为对照组，二者合用作为实验组，分别作用于 SMMC-7721细胞系球形细胞24 h，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot分析NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与结论：与8-溴-7-甲氧基白杨素单用和不同浓度索拉非尼单用对照组比较，8-溴-7-甲氧基白杨素与索拉非尼(2.5，5，10，50μmol/L)二者合用实验组明显提高了SMMC-7721细胞系球形细胞的凋亡率，且明显下调了NF-κB(p65)蛋白的表达。结果表明8-溴-7-甲氧基白杨素可增强索拉非尼对肝癌干细胞样细胞凋亡的诱导作用，作用机制与NF-κB(p65)蛋白表达下调可能相关。
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肝癌干细胞逃避5-氟尿嘧啶单药杀伤可能是造成化疗失败的重要原因
目的 通过观察5-氟尿嘧啶(5-FU)处理人肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721,分析细胞生物学特性的变化.方法 采用Cell Counting Kit-8法检测5-FU作用前后肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721增殖能力的变化;采用流式细胞法检测细胞周期组成变化和细胞群体中肿瘤干细胞标志物EpCAM、ABCG2和ICAM-1阳性细胞的比例变化.结果 10μg.ml-1 5-FU作用48h后,BEL-7402和SMMC-7721细胞增殖均明显受抑制(P＜0.05);两细胞系实验组静息期(G0/G1期)细胞比例较对照组均明显升高(P＜0.05);两细胞系中肿瘤干细胞标志物阳性细胞比例均明显升高(P＜0.05).结论 肝癌细胞系BEL-7402及SMMC-7721中的肿瘤干细胞能够逃避一定剂量5-FU的杀伤作用.肝癌干细胞逃避5-FU单药杀伤可能是造成临床化疗失败的重要原因.
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hTERT反义寡核苷酸对肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖和端粒酶活性的影响
目的 研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASPSODN)对SMMC-7721细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响.方法 不同浓度的ASPSODN转染到SMMC-7721细胞株24h和48h后分别采用MTT法、TRAP-ELISA法检测SMMC-7721细胞的增殖活性及端粒酶活性.结果 各浓度组的ASPSODN均能降低端粒酶活性,作用24h时,不同浓度均明显受抑,其中0.8μmol/L ASPSODN较0.2μmol/L和0.4μmol/L组抑制作用更明显(P＜0.05),但再增大浓度抑制作用并不随着增加.作用48h后,抑制作用减弱,低浓度组(0.2、0.4μmol/L)端粒酶活性恢复到正常水平,而高浓度组(0.8、1.0、1.2μmol/L)抑制作用依然明显,端粒酶活性低于60％.MTT法检测显示,不同浓度ASPSODN组对SMMC-7721细胞的生长均有抑制作用,随着浓度的增加,抑制作用明显,但随着时间的延长,抑制作用增加不明显.结论 ASPSODN靶向hTERT能特异性抑制SMMC-7721细胞增殖,明显下调端粒酶活性,hTERT可能成为肝癌治疗的一个靶点.
关键词： hTERT基因 反义寡核苷酸 SMMC-7721细胞系 端粒酶活性 -
肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达
背景与目的:NET-1是近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道.本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PGR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1 mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度.用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达.结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达:肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28).肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P＜0.05).(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆.(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P＜0.05).(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P＜0.05).结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值.
