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氯化锰致大鼠神经毒性机制的研究
为研究不同剂量的氯化锰对大鼠脑纹状体谷氨酰胺合成酶(GS)、磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)和大脑皮质Na+ -K+ -ATPase和Ca2+ -ATPase活力的影响,将32只SD大鼠,按体重随机分成4组.第1组为对照组,皮下注射生理盐水,第2～4组为不同剂量染锰组,分别皮下注射50、100和200 μmol/kg的氯化锰溶液,每周注射5次,连续染毒4周.观察大鼠体重变化和一般表现.后一次注射后24 h处死大鼠,切取纹状体,测定GS和PAG的活力;切取大脑皮质,测定Ca2+ -ATPase和Na+ -K+ -ATPase的活力.结果显示,随着染锰剂量的增加,脑纹状体CS活力降低,PAG活力升高,大脑皮质Ca2+ -ATPase和Na+ -K+ -ATPase活力降低.与对照组比较.在50、100和200 μmol/kg染锰组GS和Na+ -K+ -ATPase活力逐渐下降,差异有统计学意义;在100和200 μmol/kg染锰组PAG的活力逐渐升高,Ca2+ -ATPase活力逐渐下降,且差异有统计学意义.说明不同剂量氯化锰可引起大鼠脑纹状体GS活力降低,PAG活力升高;大脑皮质Na+ -K+ -ATPase和Ca2+ -ATPase活力降低,由此可引起谷氨酸代谢失衡,产生神经毒性.
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大鼠三叉-小脑投射神经元表达磷酸激活的谷氨酰胺酶——双标法研究
磷酸激活的谷氨酰胺酶(phosphate activated glutaminase,PAG)可作为谷氨酸能神经元的标志物.采用逆行束路追踪技术和PAG免疫荧光组织化学法,研究脑干三叉核团复合体中向小脑袢状小叶Crusl区投射神经元是否呈PAG样免疫反应阳性.结果表明:将荧光金(Fluoro-Gold,FG)注入小脑袢状小叶Crusl区后,在三叉神经感觉主核(Pr5)、三叉神经脊束核极间亚核(Sp5I)和吻侧亚核背内侧部(Sp5DM)、三叉间核(15)以及三叉神经运动核与上橄榄核之间的一个小区域(nucleus J)中均可见到FG逆行标记细胞.标记细胞出现在上述核团的双侧,但以同侧为主.PAG免疫荧光组织化学反应结果显示:许多FG标记神经元呈强PAG样免疫阳性,其中FG/PAG双标神经元占FG逆行标记神经元总数的73%～94%.结果提示:脑干三叉神经核团中的谷氨酸能神经元可能参与触觉信息从面口部向小脑的传递.
关键词： 磷酸激活的谷氨酰胺酶 三叉神经核 小脑 免疫荧光 大鼠 -
大鼠GAD样、甘氨酸样和SP样阳性终末与三叉神经中脑核神经元接触--Confocal显微镜观察
应用免疫荧光组织化学双重染色和三重染色技术,在激光共聚焦显微镜下观察了大鼠三叉神经中脑核(Vme)内谷氨酸脱羧酶(GAD)样、甘氨酸(Gly)样和P物质(SP)样阳性终末与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)样阳性神经元之间的联系.结果显示:①几乎所有的Vme神经元均呈PAG样免疫阳性,这些神经元绝大多数为大的假单极神经元.②密集分布的GAD样或Gly样免疫阳性的神经终扣分别聚集于PAG样阳性的Vme神经元胞体周围,并与之形成密切接触.③SP样免疫阳性终末与PAG样阳性的Vme神经元形成接触,且这些终末中有部分与5-羟色胺(5-HT)免疫活性物质共存.以上结果表明:GABA能、Gly能和SP能投射至Vme的神经终末,可能在初级神经元即Vme水平对谷氨酸介导的口面部本体觉信息的传递具有抑制性调控作用.
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大鼠三叉神经本体觉中枢通路中VGluT1样阳性胞体和终末的生后发育、分布以及与PAG样阳性神经元的联系
本研究应用免疫组织化学和免疫荧光组织化学技术,在光镜和激光共聚焦显微镜下观察了大鼠脑干内三叉神经本体觉中枢通路中Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性神经元胞体和纤维终末的生后发育、表达和分布以及与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)样阳性神经元之间的联系.结果显示:(1)新生(P0)大鼠所有的三叉神经中脑核(Vme)神经元的胞体内均可观察到VGluT1的表达,3 d(P3)时,VGluT1的表达强,之后至P11,VGluT1的表达随着发育逐渐下降.P11后,在Vme神经元的胞体内未检测到VGluT1样免疫阳性产物,但在阴性胞体周围可观察到VGluT1样免疫阳性终末分布;(2)生后0 d,三叉神经脊束核吻侧亚核背内侧部及其邻接的外侧网状结构(Vodm-LRF)、三叉神经感觉主核背内侧部(Vpdm)和三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)内已可观察到VGluT1样阳性纤维终末分布.生后7 d,VGluT1样阳性纤维终末开始在三叉神经运动核腹侧区(AVM)、上橄榄核背侧区(ADO)出现;(3)激光共聚焦显微镜下,于生后12 d在Vme、Vodm和Vpdm内和生后21 d在Vsup-CL内分别观察到一些VGluT1样阳性终末与PAG样阳性神经元的胞体或树突形成密切接触.以上结果提示:VGluT1可能与生后发育过程中大鼠脑干内三叉神经本体感觉中枢通路的兴奋性联系的建立密切相关.
