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正交试验法优化畲药山里黄根多糖的提取工艺
目的:优选山里黄根多糖的提取工艺.方法:设计单因素试验和正交试验,以多糖含量为指标,采用苯酚-硫酸法,比较影响多糖含量主要因素的主次关系,优化提取条件,确定佳提取工艺.结果:影响山里黄根多糖提取率的主次因素为:料液比＞提取次数＞提取温度＞提取时间;山里黄根多糖的佳提取工艺条件为:提取温度100℃、提取时间100 min、料液比1∶10(g/mL)、提取次数3次,在此条件下,多糖提取率可达72.49 mg/g.结论:优选的山里黄根多糖提取工艺提取率较高,且方法稳定可行.
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畲药山里黄根水提液对CCl4体外诱导L-02肝损伤作用有效部位筛选
畲药山里黄根为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥根,具有清热、凉血、解毒作用川,在浙江、福建、广东、广西、湖南等地应用极广,主要用于乙型、丙型病毒性肝炎、肝炎等病症的治疗,有较好的开发利用前景[2-3].四氯化碳(CCl4)是一种强烈的能够引起肝细胞坏死的化合物,一直被研究者用来诱发各种肝损伤模型,利用肝损伤以后药物对于肝细胞的作用以阐明实验药物的肝毒性机制或肝损伤保护机制[4-7].含有山里黄根的中药制剂在治疗肝病方面的疗效尤为显著[8],对损伤的肝细胞有一定的保护作用.我们通过山里黄根不同极性萃取部位的对水提液CCl4体外诱导L-02肝细胞损伤模型的保护作用进行实验研究,采用MTT法[9-11]测定细胞OD值并统计细胞存活率,作为判断山里黄根不同极性萃取部位水提液对于CCl4体外诱导L-02肝损伤作用的重要指标,从而初步筛选出具有肝保护作用的药物有效部位.
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畲药山里黄根水提液对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用
目的:探讨畲药山里黄根水提液对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法:采用CCl4所致小鼠急性肝损伤模型,60只小鼠随机分为6组:正常组、模型组、联苯双酯组(150mg/kg)、山里黄根水提液低剂量组(1.5g/kg)、山里黄根水提液中剂量组(3.0g/kg)、山里黄根水提液高剂量组(6.0g/kg),检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)指标,测定小鼠肝脏中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)指标,并观察小鼠肝组织病理形态学变化.结果:山里黄根水提液低、中、高剂量组均可显著降低血清ALT和AST活性(P＜0.05),均可显著降低肝脏中MDA含量(P＜0.05),并能显著升高肝脏中GSH-Px活性(P＜0.05).此外,山里黄根水提液对CCl4急性肝损伤小鼠肝脏组织的病理学改变具有改善作用.结论:畲药山里黄根水提液对CCl4所致小鼠急性肝损伤有显著的保护作用.
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畲药山里黄根水提物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
目的 探讨畲药山里黄根水提物对卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用.方法 ICR小鼠,♂,随机分为正常组、模型组、山里黄根高、中、低剂量组和联苯双酯组.小鼠尾静脉注射BCG和LPS诱导小鼠免疫性肝损伤,正常组注射等体积的生理盐水.全自动生化分析仪分析小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,ELISA法测定血清中IL-2、IL-4、IL-10和TNF-γ的含量.HE染色观察小鼠肝脏的病理改变.结果 与模型组相比,山里黄根水提物能显著降低小鼠血清ALT、AST的活性(P＜0.05),显著升高炎性因子IL-2与IL-10水平(P＜0.05),显著降低炎性因子IL-4与TNF-γ水平(P＜0.05).与模型组相比,山里黄根水提物组小鼠肝组织炎症细胞浸润、水肿、坏死结构和免疫复合沉淀物均明显减轻.结论 山里黄根水提物对BCG联合LPS诱导的免疫性肝损伤具有保护作用.
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畲药山里黄根品质生物效价检测
目的: 建立畲药山里黄根的抑菌效价测定方法,测定山里黄根的抑菌效价值.方法: 采用抑菌试验考察山里黄根水提液对5种标准菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、铜绿假单胞菌)的抑菌性;采用微生物比浊仪建立山里黄根生物效价评价方法,并与HPLC法测得的竹节参皂苷Ⅳa含量进行对比.结果: 山里黄根对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌敏感度较高;所建立的比浊法回收率在 90.0% ~ 110.0% 范围内,可信限率均在5%以内;山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa含量与效价测定结果不尽相同.结论: 所建立的生物效价检测方法可作为畲药山里黄根质量评价的方法之一.
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畲药山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量测定
目的:建立高效液相色谱法测定山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa的含量.方法:应用HPLC法测定,色谱柱为AgilentZorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(33∶67);流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃;检测波长为203 nm.结果:山里黄根中竹节参皂苷Ⅳa与其他组分分离效果良好,理论板数在10 000以上.竹节参皂苷Ⅳa的线性范围为12.610～252.200 μg·ml-1(r=1.000 0);平均加样回收率为98.13％,RSD=1.26％(n=6).结论:该方法简便易行、准确、重复性好,可用于山里黄根的质量控制.
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畲药山里黄根的质量标准研究
目的:研究山里黄根的质量标准,为制定合理的质控方法提供科学依据.方法:运用薄层色谱法、高效液相色谱法分别对齐墩果酸、竹节参皂苷Ⅳa进行定性、定量测定;参照中国药典2010年版附录相关方法对山里黄根的醇溶性浸出物、水分和总灰分进行测定.结果:山里黄根薄层色谱鉴别特征性明显;竹节参皂苷Ⅳa质量浓度在12.61 ～252.2 μg· mL-1范围内呈线性,回归方程为Y=2.016X+1.372(r=1.000),平均回收率为98.4％(RSD=1.3％).18批山里黄根样品的测定结果表明,竹节参皂苷Ⅳa的含量为0.013％ ～0.086％,醇溶性浸出物的结果为7.7％ ～13.6％,水分为4.1％～9.7％,总灰分为1.3％～4.6％.结论:研究所得方法简便、准确、重现性好,可用于山里黄根的质量控制.
