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低氧微环境对胎鼠成纤维细胞HIF-1α和PTEN表达及细胞周期的影响
目的 探讨低氧条件下HIF-1 α和PTEN在胎鼠成纤维(MEFs)细胞增殖、分化中可能的调控作用,以及低氧对细胞周期的影响.方法 低氧条件( 5％O2 95％N2)下培养MEFs不同时间(0、2、4、6、8h)后,应用免疫细胞化学、RT-PCR检测方法,观察MEFs中HIF-1 α和PTEN的表达并检测其细胞周期.结果 免疫组化结果表明,HIF-1 α及PTEN蛋白的表达均随低氧时间增长而逐渐增强.RT-PCR结果显示,HIF-1 αmRNA吸光度值常氧组为(0.93±0.06),低氧2～4h组达高峰分别为(1.46±0.05)和(2.30±0.05),随后开始下降；PTENmRNA吸光度值常氧组为(0.78±0.08),低氧2～6h组逐渐达到高峰分别(1.10±0.11)和(1.61±0.23),8h开始呈现下降趋势(P＜0.05).流式细胞仪分析显示,随着低氧时间延长,G0/G1期细胞从(86.72±0.41)％上升至(92.41±1.10)％,低氧使MEFs细胞周期阻滞于G1/G0期.结论 低氧微环境阻滞MEFs细胞周期于G0/G1期可能与PTEN和HIF-1α过表达相关.
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胎鼠成纤维细胞组织块体外培养方法的改良
目的:建立改良的胎鼠成纤维细胞(MEF)体外培养的简单有效方法,为成功培养胚胎干细胞奠定基础.方法:分别应用传统的消化法和改良的组织块贴附培养法对MEF进行体外培养,倒置显微镜下观察2种培养方法培养的原代和传代培养的MEF的生长形态、结构及细胞数量的变化.结果与结论:改良组织块贴附培养法省去了消化离心过程,简单易行,培养的成纤维细胞具有良好的增殖能力,原代培养成纤维细胞增长快,细胞产出量高,明显优于消化法培养,是MEF体外培养的良好方法.
