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XAF1和XIAP在卵巢上皮性癌中的表达及意义
目的 探讨XAF1和XIAP在卵巢上皮性癌中的表达及意义.方法 应用Western blot(26例)和免疫组化SP法检测166例卵巢上皮性癌及14例正常卵巢组织中XAF1和XIAP的表达情况,并分析与临床病理特征的相关性. 结果 XAF1在卵巢上皮性癌中的阳性表达率(33.1％),光密度值低于正常卵巢组织(71.4％,P＜0.05),XAF1在FIGO分期Ⅲ/Ⅳ期患者中的阳性表达率显著低于Ⅰ/Ⅱ期(P=0.008).而XIAP在卵巢上皮性癌中的阳性表达率(56.0％),光密度值高于正常卵巢组织(21.4％,P＜0.05).结论 XIAP高表达,XAF1低表达可能与卵巢上皮性癌的发生相关.
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XIAP在胰腺癌化疗耐药及治疗中的研究进展
X连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是凋亡抑制蛋白家族中的一员,具有抗凋亡作用.研究发现XIAP在胰腺癌中呈高表达,并且能诱导胰腺癌细胞及组织对化疗耐药.通过在基因水平及蛋白水平降低XIAP的表达对胰腺癌的治疗具有重要意义.AEG 35156是针对XIAP的反义寡核苷酸分子,能够抑制胰腺癌细胞及组织生长.RNAi能够稳定下调胰腺癌细胞中XIAP水平,从而加强TRAIL诱导的细胞凋亡,并能提高胰腺癌细胞对化疗的敏感性.针对XIAP的小分化合物能够抑制XIAP的功能,释放被XIAP抑制的凋亡起始和效应分子以及XIAP抑制的其他促凋亡蛋白,提高多种肿瘤细胞的凋亡指数及对放化疗的敏感性.XAFl能抑制XIAP的抗凋亡作用.本文就XIAP在胰腺癌化疗耐药及治疗中的研究进展做一综述.
关键词： X连锁凋亡抑制蛋白 胰腺癌 化疗耐药 X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 -
Sulfone通过转录因子Elk1调节人结肠癌细胞XAF1表达的研究
背景:Sulfone是一个高效的结肠肿瘤化学预防制剂,具有抗肿瘤功能,但其具体作用机制尚未完全明确.目的:探讨Sulfone在转录水平调节X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)表达的作用机制.方法:以Sulfone干预人结肠癌细胞株HCT116,以蛋白质印迹法检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、XAF1和ERK1/2表达；构建稳定转染pLuc-291质粒以及pLuc-291-18T、pLuc-291-70T、pLuc-291-IRFm质粒的HCT116细胞(分别为转录因子Elk1、c-ETS、IRF结合序列点突变),以荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用；以染色质免疫沉淀法检测Elk1-XAF1的DNA结合活性；以实时定量PCR检测Elk1 siRNA对XAF1 mRNA表达的影响.结果:Sulfone可显著抑制pERK1/2表达,显著上调XAF1表达.XAF1启动子Elk1结合序列点突变能显著增加Sulfone诱导的XAF1启动子转录活性,而c-ETS和IRF结合序列点突变对Sulone诱导的XAF1启动子转录活性无明显影响.XAF1启动子区域存在Elk1的特异性结合序列.以Elk1 siRNA抑制Elk1表达能显著增高XAF1mRNA表达.结论:Sulfone通过抑制ERK1/2信号通路下游转录因子Elk1活性,在转录水平上调人结肠癌细胞XAF1表达.
关键词： X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 转录因子 结肠肿瘤 Sulfone -
XAF1转录变异体在结直肠肿瘤中的差异表达
背景：X 连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）能与 XIAP 结合而拮抗其 caspase 抑制活性，从而促进细胞凋亡，已被认定是一种肿瘤抑制基因。在多种肿瘤细胞中可检测到 XAF1转录变异体，但不同转录变异体在结直肠肿瘤中的表达情况尚不明确。目的：检测 XAF1及其转录变异体在不同结直肠组织中的表达，初步探讨其在结直肠肿瘤发生、发展中的作用。方法：收集结直肠癌及其配对癌旁组织、增生性息肉、腺瘤和正常结直肠黏膜组织样本，以免疫组化法和蛋白质印迹法检测 XAF1蛋白表达，RT-PCR 检测 XAF1转录变异体表达。结果：与正常结直肠黏膜相比，XAF1蛋白在增生性息肉、腺瘤和癌组织中的胞核表达强度显著降低（ P <0.05），胞质表达强度有所增高（P >0.05），总体表达强度显著降低（P <0.05）。结直肠癌组织中的 XAF1A 蛋白表达显著低于相应癌旁组织（P <0.05）。转录变异体 XAF1A、XAF1B、XAF1C mRNA 在结直肠肿瘤中的表达均显著低于正常结直肠黏膜（P <0.05）。结论：XAF1及其转录变异体在结直肠肿瘤和正常结直肠黏膜中存在差异表达，腺瘤阶段即已出现 XAF1表达下降并由胞核向胞质易位。转录后修饰可能影响 XAF1基因功能。
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Sulfone通过抑制ERK途径上调XAF1表达诱导结肠癌细胞凋亡
目的:探讨化学预防药物Sulfone是否通过转录调节XAF1的表达诱导结肠癌细胞凋亡.方法:采用Hoechst 33258染色法检测人结肠癌细胞株HCT116(p53野生型)和SW480 (p53突变型)经Sulfone处理后的细胞凋亡率.运用Western印迹法检测上述细胞经Sulfone处理前后XAF1、磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)和ERK1/2总蛋白质的表达量变化.通过双重荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用.结果:Sulfone能诱导HCT116和SW480细胞凋亡,其效应随剂量的增加和时程的延长而更明显.Sulfone能有效抑制上述两种细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化(抑制率分别为74％和57％,P＜0.05),但上调XAF1蛋白的表达(2.2倍和3.1倍,P＜0.05).经Sulfone处理后,XAF1启动子的转录活性在HCT116和SW480细胞分别提高了3.3倍(P＜0.01)和2.6倍(P＜0.05).结论:Sulfone通过抑制ERK途径,在转录水平显著上调XAF1的表达进而诱导细胞凋亡,且这种作用的强弱与肿瘤细胞的p53分型有关.
关键词： 结肠癌 Sulfone X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1 凋亡 -
稳定过表达XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株的构建
目的：构建稳定过表达X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1（ X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1，XAF1）基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。方法分别将携带XAF1基因感染复数（ multiplicity of infection，MOI）为50的慢病毒稀释液、MOI为100的慢病毒原液和MOI为100的慢病毒原液加入终浓度为5μg/mL的聚凝胺（ polybrene）转染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率，通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction，qRT-PCR）和蛋白免疫印记法（ western blot）检测XAF1基因mRNA和蛋白的表达。结果慢病毒稀释液转染，约60％的细胞可观察到微弱荧光；慢病毒原液转染，约70％的细胞观察到较弱荧光；慢病毒原液加入5μg/mL polybrene的转染效率较高，约90％的细胞观察到较强荧光。嘌呤霉素筛选上述转染效率高的慢病毒原液加5μg/mL polybrene组细胞，其成功将携带XAF1基因的慢病毒转入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。 qRT-PCR和western blot进一步证实细胞株稳定过表达XAF1基因。结论慢病毒加polybrene转染可成功构建稳定过表达XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。
