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β-分泌酶与阿尔茨海默病
β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)在β位点裂解β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)并产生β淀粉样蛋白(amyloid protein β,A β),Aβ的聚集是形成阿尔茨海默病(Alzhemier's disease,AD)患者脑中老年斑的主要原因,引起神经元损伤和认知功能减退,在AD的发病过程中起到中心和共同通道的作用.BACE的抑制剂部分抑制BACE,可使Aβ水平下降,取得明显疗效.进一步研究BACE抑制剂的作用机制,对AD治疗具有良好的前景.
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淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌
目的 观察淀粉样前体蛋白(APP) β位点单链抗体(scFv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础.方法 以APP β位点scFv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pcDNA3.1hyg(+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695 sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(sAPPα)的含量,并分别比较两者的变化.结果 经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APP β位点scFv基因片段,且与真核表达载体正确相连.转染APP695 sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4%、sAPPα水平上升23.1%.结论 APP β位点scFv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂.