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人转化生长因子β1基因转染骨髓基质干细胞复合藻酸钙修复骨软骨缺损
目的:拟利用人转化生长因子β 1基因转染骨髓基质干细胞,再与可降解藻酸钙材料复合构建具有较好生物学活性的组织工程化人工骨软骨,以期获得良好的软骨间整合.方法:雄性12个月龄的崇明山羊18只.由上海交通大学附属第九人民医院动物实验中心提供.携带人转化生长因子β 1基因的重组腺病毒由上海交通大学附属第九人民医院骨科研究室提供.制备藻酸钙凝胶的氯化钙、藻酸钠为Gibco公司产品.从羊髂嵴抽取8 mL骨髓,贴壁法分离培养骨髓基质干细胞,传至第3代以携带人转化生长因子β 1基因的重组腺病毒转染过夜.18只山羊均于双膝股骨内髁负重区建立骨软骨缺损模型,造模后分为3组,6只,组:转染细胞-藻酸钙组将转染人转化生长因子β 1基因的骨髓基质干细胞悬于1.2%藻酸钠中,调整细胞密度为5×1010L-1,吸取5 mL注入骨软骨缺损处,随后缓慢滴入过量的2.5%氯化钙,使氯化钙与藻酸钠发生交联反应形成藻酸钙凝胶.复合对照组同法注入未转染人转化生长因子β 1基凼的骨髓基质干细胞-藻酸钙凝胶,模型组不给予任何干预.转染后Western blot法检测细胞外源基因的表达.移植后组织形态学检查及缺损评分.结果:人转化生长因子β 1基因转染后,骨髓基质干细胞表达人转化生长因子β 1,并分泌细胞外基质Ⅱ型胶原及Aggrecan.移植后24周,转染细胞-藻酸钙组缺损获得类透明样软骨修复,复合对照组及模型组均为纤维组织或纤维样软骨修复.与模型组比较,移植后第12,24周复合对照组、转染细胞.藻酸钙组骨软骨缺损组织形态学评分均明显升高(P<0.05),且转染细胞-藻酸钙组升高幅度显著大于复合对照组(P<0.05);转染细胞.藻酸钙组缺损评分随着修复时间的延长而明显升高(P<0.05).结论:实验成功将组织工程学与分子生物学有机结合,经基因修饰的骨髓基质干细胞可使人转化生长因子β1持续高效发挥作用,并逐步转化为成熟的软骨细胞且分泌软骨基质,与藻酸钙复合修复骨软骨缺损效果满意.
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重组hTGF-β1基因转染骨髓间充质干细胞及其表达
目的 探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及其表达的可行性.方法 重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染猪BMSCs.转染后72 h,RT-PCR检测BMSCs的hTGF-β1mRNA表达;免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附定量测定(ELISA法)hTGF-β1蛋白表达;MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,以验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性.结果 转染后72 h,BMSCs能有效表达hTGF-β1mRNA,胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,其蛋白表达量是转染adeno-lacZ的2.65倍(P＜0.05);MTT法检测结果显示,转染adeno-hTGF-β1的BMSCs所分泌的hTGF-β1蛋白对MV-1-Lu细胞的生长有显著抑制作用.结论 重组adeno-hTGF-β1能够被导入BMSCs,并表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白.为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础.
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儿童过敏性鼻炎治疗前后外周血CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞与炎症因子变化分析
目的 探讨儿童过敏性鼻炎(AR)治疗前后外周血CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg及白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、人转化生长因子β1(TGF-β1)的水平变化及临床意义.方法 将厦门长庚医院收治的108例AR患儿作为AR组,根据疾病严重程度分为轻度、中重度组,另采用单纯随机抽样法选取年龄、性别匹配的80例健康儿童作为对照组,检测两组对象入院时CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、IL-2、TNF-α、TGF-β1水平;AR患者均给予对症治疗,检测治疗前、治疗1个月、治疗6个月CD4+ CD25+ CD127la/-Treg、IL-2、TNF-α、TGF-β1水平,采用Pearson相关分析疾病严重程度与外周血CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg 的相关性及两者与IL-2、TNF-α、TGF-β1相关性.结果 AR患者CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、IL-2、TGF-β1水平分别为(6.264±0.135)％、(50.16±11.67) ng/L、(14.21±5.34) ng/L,均低于对照组;TNF-α为(1.82±0.62) ng/L,高于对照组的(0.34±0.19)ng/L,差异均有统计学意义(P＜0.05).轻度AR患者CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、IL-2、TGF-β1水平分别为(6.305 ±0.137)％、(59.34±13.05)ng/L、(16.97-±4.69) ng/L,均高于中重度AR组患者,TNF-α水平为(1.64±0.57) ng/L,低于中重度AR组患者的(1.93±0.65) ng/L,差异均有统计学意义(P＜0.05).AR组治疗后第1、6个月CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、IL-2、TGF-β1水平高于治疗前,TNF-α水平低于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析显示:外周血CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg、TNF-α与疾病严重程度呈正相关关系(r=0.681、0.581,P＜0.05),IL-2、TGF-β1与疾病严重程度呈负相关关系(r=-0.613、-0.579,P＜0.05);外周血CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg与IL-2、TGF-β1呈负相关性(r=-0.675、-0.691,P＜0.05),与TNF-α呈正相关关系(r=0.618,P＜0.05).结论 AR患者存在CD4+ CD25+ CD127lo/-Treg及IL-2、TGF-β1下降,TNF-α上升,且与病情程度有关,治疗后均明显改善.
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联合检测支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α及人转化生长因子β1的临床意义
目的 探讨结缔组织疾病与其他病因所致间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和转化生长因子β1(transform growth factorβ1,TGF-β1)的差异.方法 2010年6月至2011年5月在我院诊治的13例结缔组织疾病所致间质性肺疾病(interstitial lung disease with connective tissue disease,CTD-ILD)患者(CTD-ILD组)、12例其他病因所致的间质性肺疾病(NCTD-ILD)患者(NCTD-ILD组)和21例同期健康体检者(对照组),均采用ELISA法测定BALF中TNF-α及TGF-β1水平.结果 CTD-ILD组和NCTD-ILD组两项因子均明显高于对照组,且CTD-ILD组高于NCTD-ILD组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 BALF中TNF-α及TGF-β1水平差异有助于间质性肺疾病的诊断,两项因子联合检测对于CTD-ILD的鉴别诊断亦有提示意义.
