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丹参诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化及相关基因的表达
背景:骨髓间充质干细胞在适当的诱导条件下,可在体内外分化为神经细胞与神经前体细胞,但多数研究多以含血清及细胞因子的培养基为诱导剂.目的:以丹参作为诱导剂,观察骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后相关基因的表达,拟寻找新的诱导方法.设计:以细胞为观察对象的重复观察测量,对照性体外实验.单位:四川大学基础与法医学院人体解剖教研室.材料:实验于2004-10/2005-12在四川大学基础与法医学院人体解剖教研室完成.为四川省重点实验室.SD大鼠,体质量150～200 g,由本校动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.丹参注射液由安徽天洋药业有限公司提供,批号20050411.方法:采用密度梯度离心和细胞贴壁法培养骨髓间充质干细胞,取第5代细胞进行诱导.用丹参注射液诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,对照组以不含丹参注射液的无血清培养液进行培养.采用RT-PCR检测诱导前后细胞ngn-1,mash-1的表达,免疫组织化学检测诱导前后的骨髓间充质干细胞NSE和GFAP的表达.主要观察指标:①RT-PCR检测细胞诱导前后ngn-1,mash-1的表达.②免疫组织化学检测诱导前后的骨髓间充质干细胞NSE和GFAP的表达.结果:①骨髓间充质干细胞贴壁生长情况良好,大部分细胞贴壁呈长梭形.加入诱导剂后,细胞体秘缩小,部分细胞有突起,形状类似神经元.②RT-PCR反应检测显示,未经诱导的骨髓间充质干细胞ngn-1,mash-1mRNA为阴性,诱导后呈阳性表达.③细胞免疫组织化学检测显示,诱导后的细胞NSE和GFAP呈阳性反应,对照组为阴性.结论:丹参注射液能够诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化.
