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小鼠白细胞介素21文献资料
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小鼠白细胞介素21原核表达载体的构建及活性鉴定
目的:白细胞介素21是近年发现的由T细胞分泌的细胞因子,具有广泛的免疫调节作用和抗肿瘤活性.为进一步观察其体内外免疫作用,拟构建小鼠白细胞介素21(mIL-21)原核表达载体,并对其表达的活性进行鉴定.方法:实验于2006-03/2007-05在南京医科大学附属南京儿童医院儿科研究所和东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系完成.实验材料:实验中所用BALB/c小鼠由扬州大学比较医学中心提供,六七周龄,雌雄兼备,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.pcDNA3.1/mIL-21质粒由东南大学基础医学院免疫学实验室提供.实验方法:以pcDNA3.1/mIL-21质粒为模板,PCR获得长度为369 bp的mIL-21基因片段.将其定向克隆至pET-28a(+)质粒中,采用PCR酶切和测序等方法对重组质粒进行鉴定.并对重组蛋白进行IPTG诱导表达、Western blot及体外生物学活性检测.结果:构建了重组原核表达载体pET-28a(+)/mIL-21,经鉴定后证实重组质粒构建正确.SDS-PAGE显示含重组质粒的诱导菌在Mr16 000位置出现一蛋白条带.Western blot结果显示该蛋白具有良好的免疫原性.体外生物学功能检测显示该重组蛋白能够增强小鼠脾细胞中的NK细胞杀伤活性.结论:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)/mIL-21,表达的mIL-21具有良好的免疫原性.
