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胶原膜包裹及环孢素A对鸡羽根角蛋白移植物组织相容性的改善作用
背景:前期实验提出将鸡羽根角蛋白管作为神经桥按材料这一设想,发现机体组织对鸡羽根角蛋白有一定的免疫捧斥作用埋植十于料周围组织中有人量炎性细胞出现.目的:观察经胶原膜包裹或应用免疫抑制剂后,鸡羽根角蛋白材料在体埋植对周围组织的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-1012007 01在南方医科大学组织学与胚胎学实验室完成.材料:选择SD大鼠42只,按随机数字表法分成5组,空白对照组6只,其余备组各9只.方法:参照胶原蛋白提取方法,由牛跟腱提取胶原蛋白.将经特殊处理的鸡剁根角蛋白埋植入大鼠竖脊肌组织中,鸡羽根角蛋白材料+环孢素A组大鼠材料埋植后2 周腹腔注射环孢素A5 mg/(kg·d):鸡羽根角蛋白材料浸泡环孢素A组将材料组仅埋泡于2.5 g/L 环孢素A后埋植:胶原膜包裹鸡羽根角蛋白材料组应用胶原膜包裹材料后埋植:单纯鸡羽根角蛋白材料组仅埋植材料:空白对照组仅作切口,不埋植材料.主要观察指标:分别于材料埋植后2,4,8周取材,光镜下观察埋植材料的降解情况及对周围组织的影响,应用免疫组织化学方法检测周围组织巨噬细胞的浸润情况.结果:①材料埋植后备组大鼠一般状况良好,刨口未见肿胀及渗液.②材料埋植后2,4,8周,材料埋植周围组织可见大量巨噬细胞,尤其足多核巨细胞分布于材料边缘,吞噬材料:炎性细胞数量较少,以鸡羽根角蛋白材料+环孢索A组为著.③材料埋植后2,4,8周各组材料埋植周围组织均可见CD68阳性表达细胞,其中4周时巨噬细胞阳性数比其他两个时点多(P<0.05).结论:短期应用免疫抑制剂可显著改善鸡羽根角蛋白的在体组织相容性;鸡羽根角蛋自在体内可降解,巨噬细胞尤其是多核巨细胞参与了该过程.
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鸡羽根角蛋白管毒性作用的研究
目的 观察鸡羽根角蛋白管作为组织工程材料的毒性作用.方法 分别制备不同处理强度的3种鸡羽根角蛋白管的浸提液并测定其化学成分.采用皮肤致敏实验(大鼠)、皮内刺激实验(家兔)、小鼠全身急性毒性实验以及体外细胞毒性实验观察鸡羽根角蛋白管浸提液的体内和体外毒性作用.结果 鸡羽根在浸出液中释放的主要物质为中等分子量的肽类物质,大分子蛋白释放不多.皮肤致敏实验和皮内刺激实验显示对浸提液不引起皮肤及皮内红斑、水肿和坏死现象.小鼠全身急性毒性实验中,腹腔注射浸提液的小鼠未出现死亡、衰竭、发绀、震颤、严重的腹膜刺激、眼睑下垂及呼吸困难等毒性症状.体外细胞毒性实验示浸提液细胞毒性接近于0级.结论 鸡羽根角蛋白管可被水解,释放一些肽类物质,其浸提液对皮肤无致敏作用,皮内刺激反应弱,不引起全身急性毒性症状,无细胞毒性.
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胶原膜包裹或应用环孢素A改善鸡羽根角蛋白材料的组织相容性
目的 观察经胶原膜包裹或应用免疫抑制剂后,鸡羽根角蛋白(CCK)材料在体埋植对周围组织的影响.方法 30只SD大鼠,随机均分为5组.将经特殊处理的CCK埋植入竖脊肌组织中.实验组:A组为CCK材料埋植加术后两周腹腔内注射免疫抑制剂环孢素A(CsA,日剂量5 mg/kg),B组为CCK材料浸泡CsA(2.5 mg/ml)后埋植,C组为胶原膜包裹CCK材料后埋植,D组仅埋植CCK材料.空白对照组仅作切口,不埋植材料.分别于术后2、4、8周取材,常规切片染色,光镜下观察埋植材料的降解情况及对周围组织的影响,免疫组织化学术检测周围组织内T淋巴细胞浸润情况.结果 术后各组大鼠一般状况良好,术后第2、4、8周,可见大量巨噬细胞,尤其是多核巨细胞分布于材料边缘,吞噬材料.炎性细胞数量较少.第2、4、8周A组CD3阳性表达细胞数较B组少,与D组有显著差异(P＜0.05),A组与空白对照组无显著差异(P＞0.05).结论 短期应用免疫抑制剂可显著改善CCK的在体组织相容性;CCK在体内可降解,巨噬细胞,尤其多核巨细胞参与了该过程.
