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运动训练对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA表达的影响
目的:观察运动训练对脑梗死大鼠梗死灶周围皮质神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA表达的影响.方法:实验于2002-04-30/2003-04-20在河北省人民医院中心实验室完成.取雄性Wistar大鼠50只,随机分为假手术组(n=10)和模型组(n=40).模型组大鼠采用电凝大脑中动脉法制作大脑中动脉阻塞模型,术后48 h随机分为训练组和非训练组,每组20只,训练组每天被动跑笼1次,40 min/次,每跑5 min休息2 min,非训练组不运动.假手术组不电凝大脑中动脉也不训练.假手术在术后7 d处死,训练组和非训练组在造模后7,14,21和28 d分别处死5只,用原位杂交法检测梗死灶周围皮质神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达.结果:经补充后50只大鼠进入结果分析.①梗死灶周围神经细胞黏附分子mRNA表达:模型组增加非常明显,于第7天高,一直至第28天与假手术组比较仍有明显差异;训练组第14,21,28天其表达均明显高于非训练组(4.21±0.46,3.68±0.49,3.24±0.26;3.70±0.31,3.19±0.40,2.81±0.45,P＜0.05).②梗死灶周围皮质胶质细胞源性神经营养因子mRNA:模型组表达强于假手术组(P＜0.01);非训练组于第7天表达高(4.07±0.23),第14天仍高于假手术组(3.84±0.42);训练组于第14天时高(4.19±0.59),第21天仍高于非训练组(3.65±0.40,3.46±0.37),但无统计学差异.结论:脑缺血梗死可诱发神经细胞黏附分子mRNA及胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达,运动训练可增加其表达.提示神经细胞黏附分子和胶质细胞源性神经营养因子可能参与了脑缺血损伤后脑的可塑性变化过程且与功能恢复有关.
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神经细胞黏附分子L1-Ig(1-4)的原核表达及其功能
目的:利用基因克隆、表达、纯化等分子生物学手段获取具有生物活性的神经细胞黏附分子L1(L1)的Ig(1-4)结构域融合蛋白.方法:实验于2001-10/2004-12在解放军第二军医大学神经生物教研室完成.①从新生4 d的SD大鼠的海马组织中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应法获取L1-Ig(1-4)基因,进行序列分析后构建表达载体pET28a(+)-L1-Ig(1-4).②转染大肠杆菌BL21,用IPTG诱导L1-Ig(1-4)的表达.③利用Ni2+-NTA柱纯化和复性.④用L1-Ig(1-4)融合蛋白观察培养脊髓原代神经元轴突生长情况及其活性,未加入融合蛋白的细胞做对照.结果:①克隆出编码正确的大鼠L1-Ig(1-4)基因.②并在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物占全菌总蛋白的28.3%.③Ni2+-NTA柱纯化后的纯度达90%以上.④加入融合蛋白后脊髓神经元突触的生长能力较未加入融合蛋白的细胞增强[(56±3.8),(43±2.7)μm,P＜0.01].结论:通过原核表达可大量获得L1-Ig(1-4)融合蛋白,该融合蛋白同样具有促神经生长的生物学活性.
