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颈动脉血管重构特征在自发性高血压大鼠体内的表现
目的:血管重构是高血压的重要病理变化,是高血压导致器官损害的结构基础.实验观察自发性高血压大鼠颈动脉中层组织学的相关变化,以验证血管重构的特点.方法:实验于2006-06/2007-03在福建医科大学附属协和医院心血管内科实验室完成.①实验材料及分组:12周龄雄性自发性高血压大鼠10只,同性别周龄的WKY大鼠10只为对照,喂养18周后终止实验.②实验过程及评估:开始及每2周测鼠尾收缩压.实验结束后,麻醉后取颈动脉,行苏木精-伊红、苦味酸-天狼星红、弹力纤维和胶原纤维的双重染色(P/VB法),利用计算机辅助成像系统测算颈动脉中膜厚度、腔径、血管中膜厚/腔径,中膜横截面积、中膜细胞平均核面积及中膜的胶原面积百分比、弹性纤维面积百分比、弹性纤维面积与胶原面积的比值.SP免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白、增殖细胞核抗原、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等抗原在颈动脉壁的表达,并计算颈动脉中膜细胞增殖指数;以原位末端标记法标记血管壁的凋亡细胞,计算颈动脉中膜细胞凋亡指数.结果:20只大鼠全部进入结果分析. ①自发性高血压大鼠实验开始和结束前的收缩压均＞150 mm Hg,高于WKY大鼠(P＜0.01).②自发性高血压大鼠颈动脉中膜厚度、腔径、中膜厚度/腔径、中膜横截面积、中膜胶原面积百分比均高于WKY大鼠(P＜0.01).而中膜弹性纤维面积百分比、弹性纤维面积与胶原面积比值均低于WKY大鼠(P＜0.01).(③α-平滑肌肌动蛋白在两组大鼠颈动脉中膜均可表达,提示中膜细胞为血管平滑肌细胞.④自发性高血压大鼠中膜血管平滑肌细胞平均核面积大于WKY大鼠(P＜0.01),中膜细胞增殖指数与WKY大鼠差异无显著性(P＞0.05),中膜细胞凋亡指数显著低于WKY大鼠(P＜0.01).⑤自发性高血压大鼠颈动脉中膜纤维粘连蛋白、层粘连蛋白的光密度值(IA值)及染色阳性面积百分比高于WKY大鼠(P＜0.01).⑤颈动脉中膜血管平滑肌细胞凋亡指数与中膜横截面积呈显著负相关(r=-0.872,P＜0.01);纤维连接蛋白表达的吸光度值与中膜横截面积呈显著正相关(r=0.954,P＜0.01).结论:自发性高血压大鼠颈动脉存在明显的重构,其特点为中膜肥厚、平滑肌细胞肥大、凋亡减少及胶原、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白的过度沉积.
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动脉粥样硬化与平滑肌细胞凋亡的调控
目的:探讨动脉粥样硬化过程中影响平滑肌细胞凋亡的各种影响因素及其传导通路.资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2003-12有关平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的文献,检索词为"atherosclerosis,apoptosis,SMC",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索中文期刊全文数据库及万方数据库1994-01/2003-12有关平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的文献,限定文章语言种类为中文,检索词为"动脉粥样硬化、凋亡、平滑肌细胞".资料选择:选取所有检索到的相关文献,包括动物实验、细胞培养和临床研究,进行初审,排除不符合要求的文献.评价指标主要是内容是否所需,资料是否真实,设计是否严密,实施过程是否严格,统计学处理是否合理.资料提炼:共检索48篇有关平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的文献,其中16篇符合要求.排除的32篇中,26篇与平滑肌细胞凋亡的调控无关,6篇内容重复.资料综合:选取16篇文献,对动脉粥样硬化中平滑肌细胞凋亡的调控因素进行深入分析.①动脉粥样硬化中影响细胞凋亡的外部信号:氧化低密度脂蛋白、机械扩张、炎性细胞因子、活性氧、血管紧张素Ⅱ和内皮素1等.②动脉粥样硬化中影响细胞凋亡的内部基因及传导信号:c-myc、Bcl-2、P53、Id3基因及白细胞介素1β转换酶家族.结论:动脉粥样硬化中平滑肌细胞凋亡的调控需要外部影响因素和内部相关基因通过不同的传导通路共同完成.
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骨髓间充质干细胞体外诱导分化为平滑肌细胞的实验
目的:探讨新西兰兔骨髓间充质干细胞在体外不同条件下定向分化为阴茎海绵体平滑肌细胞的可行性.方法:实验于2004-10/2005-05在中山大学第二附属医院实验中心完成.采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞;分别通过添加血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外直接诱导以及与阴茎海绵体平滑肌细胞不同比例(根据骨髓间充质干细胞与阴茎海绵体平滑肌细胞数量比,共培养诱导分为4:1组、2:1组以及1:1组.每6孔作为1个诱导组,每孔兔骨髓间充质干细胞终浓度为1×108 L-1,阴茎海绵体平滑肌细胞相应终浓度分别为0.25×108 L-1、0.5×108 L-1及1×108 L-1)进行共培养两种方法诱导干细胞分化为阴茎海绵体平滑肌细胞.培养2 d后的细胞爬片进行荧光免疫细胞化学染色测定抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达,全程避光进行.完成染色后,立即进行激光共聚焦显微镜镜检.每孔爬片随机取5个视野,计算出每孔中Hoechst33342与FITC(或Cy3)双阳性细胞数及Hoechst33342单阳性的细胞数的比值以计算每孔的诱导率,应用SPSS软件进行完全随机设计的方差分析.结果:①阴茎海绵体平滑肌细胞的生长特性、形态及鉴定:组织块贴壁后细胞渐游出,呈梭形或长条形,原代细胞汇合90%约需16～19 d,传代后生长加快,90%汇合时1:2传代后约3 d可再次传代.细胞融合时呈现典型的"峰-谷"样形态.传至10代之后细胞生长放缓,胞体渐变宽大,胞内颗粒增多.荧光免疫细胞化学检测特异性抗α平滑肌肌动蛋白抗体见绝大部分细胞呈阳性.②直接诱导以及共培养诱导的初步分析结果:骨髓问充质干细胞之细胞核标记良好,诱导后见胞浆表达多量抗α平滑肌肌动蛋白抗体,与阳性对照组相似;高倍镜下可清晰见平滑肌肌动蛋白肌丝,而阴性对照组只有核显色,无抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达.③不同组别诱导率方差分析S-N-K检验得各组总体均数差异性检验的(F=44.831,P＜0.05),表明统计学上有显著性差异;共培养1:1组效率高,依次是共培养2:1组、共培养4:1组,血管内皮生长因子组、血管内皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子组低,后两者间诱导效果在统计学上无差别.结论:骨髓间充质干细胞可通过添加生长因子和共培养的方法诱导分化为阴茎海绵体平滑肌细胞,其中以共培养的方法效率较高.
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电针足阳明经穴后家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度、三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量的变化
目的:通过测定胃窦平滑肌细胞内信使物质钙离子浓度及三磷酸肌醇、环磷酸腺苷含量的变化,探讨针刺足阳明经穴对胃窦平滑肌细胞内信息转导通路的影响.方法:实验于2003-06/2004-05在湖南中医学院针灸基础实验室完成.选用清洁级健康成年新西兰大耳白兔55只,随机分为5组,每组11只.①生理盐水组耳缘静脉滴注9g/L氯化钠溶液.②阿托品组耳缘静脉滴注0.25 mg/L阿托品.③电针足阳明经穴组、电针足少阳经穴组和电针足太阳经穴组均在滴注阿托品总量的一半时,分别电针双侧足阳明经穴、足少阳经穴、足太阳经穴30 min.各组分别处理后,分离胃窦平滑肌细胞,制成活的单个平滑肌细胞悬液;测定胞内钙离子浓度采用荧光法;测定胞内三磷酸肌醇含量应用蛋白质竞争结合分析法;测定胞内环磷酸腺苷含量采用放射免疫计数法.结果:纳入家兔55只,每组11只.终进入结果分析动物数为:钙离子浓度分析55只,每组11只,无脱失;三磷酸肌醇及环磷酸腺苷含量分析数均为45只,均脱失10只.①各组家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的比较:阿托品组、足少阳经穴组与足太阳经穴组钙离子浓度明显低于足阳明经穴组[(172.97±60.38),(203.57±72.20),(183.52±76.81),(321.22±55.36)nmol/L(F=9.37,P<0.01)].②各组家兔胃窦平滑肌细胞内三磷酸肌醇含量的比较:阿托品组、足少阳经穴组、足太阳经穴组三磷酸肌醇含量均明显低于足阳明经穴组[(21.87±10.16),(21.08±10.97),(23.81±12.06),(39.00±12.97)pmol/106(F=3.61,P<0.01)].③各组家兔胃窦平滑肌细胞内环磷酸腺苷含量的比较:各组差异均无显著性意义(P>0.05).结论:针刺足阳明经穴可使家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子、三磷酸肌醇含量明显增高.脑肠肽是足阳明经与胃相关的重要物质基础,参与调节胃平滑肌运动的脑肠肽受体后信号转导通路可能与胞内钙离子、三磷酸肌醇等信使物质有关.
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钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞Ca2+内流的作用机制
[目的]探讨钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞中Ca2+内流的作用机制.[方法]将酶解分离好的大鼠结肠平滑肌细胞,随机分为以下4组:①对照组;②EGTA组;③ EGTA+Veraparmil组;④ EGTA+W7组.荧光探针Fura-2/AM标记细胞内游离Ca2+,荧光分光光度计检测大鼠结肠平滑肌细胞Ca2+浓度.[结果]在无Ca2+缓冲液中加入EGTA(1 mmol/L) 使Ca2+浓度由静息时(82.24±3.65)nmol/L升高至(267.45±4.86 )nmol/L,继之,向细胞外液中引入两种浓度的Ca2+ (1.5 mmol/L和3.0 mmol/L),导致Ca2+浓度进一步升高,分别为( 470.23±4.21)nmol/L、(945.32±3.56)nmol/L.上述升高效应对L型电压操纵性钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil,5 μmol/L)不敏感(P>0.05),但钙调蛋白抑制剂W7对上述升高效应有抑制作用(P<0.01).[结论]钙调蛋白参与大鼠结肠平滑肌细胞的钙内流.钙调蛋白抑制剂W7能抑制由EGTA引起的细胞钙内流.这对于进一步深入研究钙通道活性改变,为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病具有重要意义.
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肺动脉平滑肌细胞钙含量与先心病肺动脉高压的关联性研究
目的 探讨肺动脉平滑肌细胞钙含量与肺动脉高压(Pulmonary Hypenension,PH)的关系.方法 采用流式细胞术分别检测先天性心脏病合并(PH组)或未合并(非PH组)PH患儿的肺动脉平滑肌钙离子含量.结果 PH组中肺动脉平滑肌细胞钙含量较非PH组高.差异有显著统计学意义(3.044±0.732 vs 1.079+0.409,P＜0.01).结论 肺动脉平滑肌细胞中钙含量与PH的发生有关联,检测其平滑肌细胞中钙离子含量可为临床分型提供依据.
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肌源性干细胞在周围神经缺损修复中应用的研究进展
肌源性干细胞（ MDSC）是一种具有很强增殖能力的干细胞，它主要位于成体肌肉组织中，具有良好的自我更新和向多种组织分化的潜能［1］。 MDSC来源于肌肉组织，容易获取，体外分离、培养较容易，增殖能力较强［2］。 MDSC不仅可以向肌肉细胞分化，在特定条件下通过相关诱导还可以分化成上皮细胞、内皮细胞、骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和雪旺细胞等［3］。目前国内外关于周围神经缺损修复的研究中，组织工程学是热点， MDSC被作为种子细胞进行研究，在周围神经缺损修复中具有广阔的临床应用前景。下面就对MD－SC以及其在周围神经缺损修复中应用的研究进展进行综述。
关键词： 周围神经系统疾病/治疗 干细胞 肌 平滑/细胞学 综述 -
低氧条件培养的PASMCs凋亡与p53表达变化
目的:观察低氧条件下离体培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的凋亡和p53表达的变化. 方法:采用组织块法原代培养大鼠PASMCs,应用Hoechst染色以及流式细胞术观察低氧对细胞凋亡的影响;采用免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察p53在低氧条件培养的PASMCs中的表达变化. 结果:正常条件下培养的PASMCs 和低氧条件下培养的PASMCs的凋亡变化不大,荧光显微镜下凋亡细胞计数后亦未见有统计学差异. p53在培养的大鼠PASMCs中有少量表达,低氧刺激可使其表达增高(P＜0.05). 结论:低氧未能诱导离体培养的PASMCs凋亡增加,但可以诱导p53在培养的大鼠PASMCs中的表达增加.
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CCK-8对LPS诱导大鼠血管平滑肌细胞SOD基因表达及NF-κB活性增高的影响
目的: 观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞(TASMCs)SOD基因表达的影响,初步探讨NF-κB的信号介导作用. 方法: 用贴块法培养大鼠TASMCs,经LPS, CCK-8, CCK+LPS及溶剂单独或共同孵育细胞,用RT-PCR技术检测Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA表达;用免疫细胞化学检测细胞NF-κB P65蛋白表达;用Western blot检测IκBα蛋白表达. 结果: 溶剂组存在Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA基础表达;与溶剂组相比,LPS诱导TASMCs Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA表达上调、胞核P65蛋白表达上调(P＜0.05),而胞质IκBα蛋白水降低平(P＜0.05);CCK-8可剂量依赖性地抑制拮抗LPS的上述作用(P＜0.05);CCK-8单独作用可明显抑制Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA的基础表达(P＜0.05), 而对NF-κB P65, IκBα蛋白无明显影响. 结论: CCK-8可抑制LPS诱导TASMCs Mn SOD和Cu-Zn SOD mRNA的表达,NF-κB起介导作用.
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番泻叶提取物对豚鼠结肠平滑肌细胞的收缩作用（英文）
目的研究番泻叶提取物对游离的豚鼠结肠平滑肌细胞收缩的影响. 方法用含1 g·L-1胶原酶及0.1 g·L-1大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液消化,获得游离的单个豚鼠结肠平滑肌细胞;将不同浓度番泻叶提取物加入细胞悬液中,用测微尺观察随机遇到的50个细胞长轴变化情况,计算用药前后细胞平均长度. 结果成功获得了游离的结肠平滑肌细胞. 证实不同浓度的番泻叶提取物(0.22, 0.44, 0.89 g*L-1)与平滑肌细胞共孵育后,可使细胞的平均长度缩短为 (93±20),(86±25),(85±15)μm,生理盐水对照组为(102±23)μm,细胞长度下降的百分数为8.7%,15.7%和16.6%,与对照组相比有显著差异(P<0.05);在剂量为0.22～0.89 g*L-1范围内,番泻叶对平滑肌细胞的收缩作用逐渐增强(P<0.05),呈剂量-效应关系. 结论番泻叶提取物对豚鼠结肠平滑肌细胞有直接的收缩作用.
