首页 > 文献资料
-
晚期骨关节炎患者膝关节滑膜间充质干细胞的体外成骨分化
背景：间充质干细胞是组织工程中常用的种子细胞，而来源于人膝关节滑膜组织的间充质干细胞能否作为骨组织修复与再生中合适的种子细胞还需要进一步验证。
目的：观察晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织来源的间充质干细胞体外向成骨细胞定向分化的潜能，对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。
方法：无菌条件下从行全膝关节置换的晚期骨关节炎患者膝关节腔内获取滑膜组织，Ⅰ型胶原酶消化分离获得有核细胞。以适密度接种(200个有核细胞/cm2)，挑选单细胞克隆，筛选出滑膜间充质干细胞。基础培养基培养，传至第3代时改换为含地塞米松、β-甘油磷酸钠和抗坏血酸的成骨诱导培养基诱导培养。
结果与结论：体外分离培养的滑膜间充质干细胞早期可形成葵花样细胞集落，克隆样生长。传代至第3代，细胞呈成纤维细胞样生长，形态均一。滑膜间充质干细胞成骨诱导后呈典型的“铺路石样”成骨细胞形态，诱导至第7天碱性磷酸酶染色呈强阳性，碱性磷酸酶活性表达也在诱导7 d时达高峰；诱导21 d茜素红染色可见大量钙结节形成；同时反转录PCR检测到Ⅰ型胶原、Runx2、骨结合蛋白和骨桥蛋白的表达在诱导后增加，21 d时表达高。从晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织分离获得的滑膜间充质干细胞，在体外可成功诱导分化为成骨细胞，所诱导生成的细胞具有典型的成骨细胞特性。提示滑膜间充质干细胞有望成为骨组织工程理想的种子细胞来源，在骨组织的再生修复中发挥重要作用。 -
壳聚糖-明胶支架/滑膜干细胞的相容性
目的 检测壳聚糖-明胶支架与人滑膜干细胞(SMSCs)的相容性.方法 接种滑膜干细胞于壳聚糖-明胶支架上,于第3、7和10天进行扫描电镜观察和噻唑蓝(MTT)分析.结果 扫描电镜显示支架上有大量滑膜干细胞生长,且细胞形态与对照组无明显差异,MTT分析显示支架组的A值关系为10d(1.43±0.11)≥7d(1.35±0.08)＞3d(0.43±0.08),且第7、10天组的A值明显大于同期对照组(0.64±0.15、0.59±0.13)(P＜0.05).结论 壳聚糖-明胶支架与滑膜干细胞的相容性良好.
-
水溶性石墨烯转染滑膜间充质干细胞的研究
目的:探究水溶性石墨烯转染滑膜间充质干细胞的的效果及各组间细胞克隆形成率的差别比较.方法:将传代培养到第3代的滑膜间充质干细胞分成实验组与对照组,实验组细胞培养基内加入浓度为25 mol/mL的水溶性石墨烯在37℃的条件下培养24 h,对照组用普通培养基培养37℃24 h,405 nm激发波长下的激光共聚胶显微镜下观察石墨烯是否成功转染滑膜干细胞.各组间细胞克隆形成率的差别采用单因素方差分析比较.结果:实验组的细胞培养24 h后,在激光共聚焦显微镜下细胞质可见发光的荧光点,细胞核的光强度较弱.各组克隆形成率均P＜0.05有显著差异.结论:石墨烯容易渗透到细胞质但没有进入细胞核,可以猜测石墨烯在进入活的滑膜间充质干细胞后没有发生遗传的中断.
-
DSCM支架结合兔滑膜干细胞体外构建组织工程髓核
目的 评估体外构建组织工程髓核的可行性.方法 从成年新西兰大白兔体内提纯兔滑膜干细胞(synovium-derived stem cells.SDSCs),接种到预制备的脱细胞细胞外基质(decellularized stem cell matrix.DSCM)支架中.实验分为3组:分别为空白组(空白DSCM支架)、实验组(SDSCs-DSCM复合体)和对照组(正常兔髓核组织).肉眼以及光镜下观察材料和细胞的形态特征,扫描电镜(SEM)观察各组内部结构和细胞粘附情况,HE染色观察各组细胞分布情况,荧光免疫组织化学染色观察细胞外Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白表达情况,实时定量PCR (qRT-PCR)测定两组CollagenⅡ、Aggrecan相关基因的变化,压缩载荷检测各组抗压缩性能.结果 肉眼下,组织工程髓核形态接近正常髓核;SEM显示细胞在支架内部粘附、生长良好;HE染色表明,随时间的延长,实验组材料内部细胞的分布逐渐均匀;免疫组化显示CollagenⅡ、Aggrecan分泌量随时间递增;qRT-PCR测定结果提示:实验组CollagenlⅡ、Aggrecan mRNA表达量随时间递增,但均低于正常对照组(P＜0.05);支架的压缩载荷检测结果显示:在相同位移下,SDSCs-DSCM与正常髓核的压缩载荷差异无统计学意义.结论 采用DSCM支架复合SDSCs可在体外成功构建组织工程髓核.
