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利用细胞外基质大规模扩增临床级人脂肪间充质干细胞
背景：如何运用无血清培养体系大规模扩增处于未分化状态的脂肪间充质干细胞，并使其保持“干性”是脂肪间充质干细胞临床应用转化中急待解决的难题。
目的：建立含细胞外基质的脂肪间充质干细胞体外培养系统，验证其扩增细胞的高效性、有效性及安全性。方法：在无血清培养条件下，将体外分离得到的脂肪间充质干细胞分别接种在包被细胞外基质的培养板和传统二维塑料培养板上。经过体外扩增后，比较2种条件下细胞数量、细胞表面标记物表达、细胞衰老状况以及体外多向分化能力(诱导成脂、成骨和成软骨)的差异，考察脂肪间充质干细胞在含细胞外基质的培养条件下扩增后的临床安全性。
结果与结论：脂肪间充质干细胞扩增到第5代时，包被细胞外基质培养板的细胞产量已经是传统二维塑料培养板的10倍以上，流式细胞检测表明，在含细胞外基质条件下扩增的脂肪间充质干细胞仍保持了干细胞表面特定标记物的表达。细胞衰老检测结果显示，使用包被细胞外基质的培养板扩增脂肪间充质干细胞至第15代时，细胞仍几乎无老化现象，而使用二维塑料培养板扩增的细胞在第5代时已出现明显老化，传代后细胞增殖能力明显下降。体外多向诱导分化实验显示，脂肪间充质干细胞在含细胞外基质条件下扩增至第15代时仍具有成脂、成骨和成软骨的分化功能，并且与第5代时没有明显差异，同时显著优于传统培养条件下的第5代脂肪间充质干细胞。染色体核型分析及小鼠成瘤性试验结果表明，脂肪间充质干细胞在含细胞外基质条件下扩增后仍具备临床应用的安全性。以上结果证实，含细胞外基质的无血清培养系统可以更高效且安全地扩增出具有临床应用潜能的脂肪间充质干细胞。 -
锌离子促进人骨髓间充质干细胞增殖并增强其纤黏连蛋白表达的实验研究
目的 探索适宜的锌离子浓度,以促进人间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)在无血清培养基中的黏附和增殖.方法 将人骨髓MSC培养于含胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠的α-MEM中,体系中加入不同浓度硫酸锌.培养72 h后,MTT实验测定490 nm光密度值,观察细胞增殖状态.蛋白印迹杂交比较含锌离子(1×10-5 M)培养体系与未加锌离子培养体系两组细胞纤黏连蛋白含量的差异.结果 MTT结果显示,在一定浓度范围内,锌离子促进人骨髓MSC增殖,作用呈浓度依赖性,适宜浓度为1×10-5 M;蛋白印迹实验表明,在该浓度刺激下细胞培养72 h后,纤黏连蛋白表达量显著升高.结论 锌离子可作为人无血清培养基中的一个成分,可提高入骨髓MSC的贴壁生长能力.
