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动脉粥样硬化和淀粉样变性疾病发病机制研究:血清淀粉样蛋白P与血浆脂蛋白的相互作用
目的:研究人血清中淀粉样蛋白P(serum amyloid P,SAP)与血浆脂蛋白中高密度脂蛋白(high densitylipoprotein,HDL)、极低密度脂蛋白(verylow density lipoprotein,VLDL)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)相互作用机制,为了解动脉粥样硬化和淀粉样变性疾病的发病机制提供理论依据.方法:①Sepharose 4B(Pharmacia)亲和层析法提取人血清SAP,DEAE-Sepharose层析纯化.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与标准SAP(Sigma)检测.②采用免疫探针生物素化试剂盒(Sigma)以1:10比例接合于生物素氨基己酸-N-羟基-硫琥珀酰亚胺酯.得到生物素-SAP.③VLDL,LDL,HDL用超速离心法分离.④以四甲基联苯胺(TMBZ)底物试剂盒用固相平板测定法检测SAP与脂蛋白相互结合.结果:①生理条件的Ca2+水平下,生物素-SAP以剂量依赖方式选择性地与HDL,VLDL结合.当SAP水平分别达到1.5 nmol/L和2 mol/L时,SAP与HDL, VLDL的结合达到半饱和,当SAP水平达到4 nmol/L和16 nmol/L时,SAP与HDL,VLDL结合达到饱和.②SAP与HDL和VLDL的结合具有Ca2+依赖性.③EDTA可影响SAP和HDL,VLDL结合.④无论有无Ca2+和EDTA存在,未发现SAP和LDL间的结合.结论:SAP与HDL和VLDL结合而不与LDL结合.
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p38M APK 在 Aβ25-35诱导AD大鼠不同脑区的表达
目的：探讨p38在Aβ25-35诱导阿尔茨海默病（AD ）大鼠嗅球及海马的表达差异及其在AD的可能机制。方法：将SD大鼠随机分为阴性对照组、痴呆组、抑制剂组和溶媒对照组。采用Aβ25-35单次侧脑室注射诱导AD大鼠模型，应用Y-迷宫观察大鼠的学习与记忆能力变化，免疫组化法检测嗅球、海马CA1区p-p38在活体的表达。结果：AD大鼠的学习及记忆功能在造模后第7d和第14d受到损害，与阴性对照组及抑制剂组比较差异有统计学意义；造模4d后痴呆组海马CA1区及嗅球出现明显的p-p38表达，在不同时间点痴呆组及溶媒对照组p-p38阳性细胞数分别明显高于阴性对照组及抑制剂组，抑制剂组p-p38的表达在各时间点较痴呆组及溶媒对照组明显下降；在各时间点每组海马CA1区p-p38水平均高于嗅球区；p-p38在两部位的表达规律相似，但海马CA1区对损伤的敏感性要高于嗅球，SB203580可部分减少Aβ25-35引起的海马CA1区及嗅球损害。结论：Aβ25-35诱导的大鼠脑内p38表达可在海马CA1区及嗅球，但是CA1区更明显，p38抑制剂可减轻这种损害，有望成为治疗AD的药物。
