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MV3和HaCaT细胞接种去表皮真皮组织上构建人工皮肤黑素瘤模型
背景：课题组曾成功的用 MV3黑素瘤细胞和人角质形成细胞体外重建黑素瘤三维模型。
目的：利用MV3黑素瘤细胞和HaCaT细胞结合去表皮的真皮体外重建黑素瘤模型。
方法：MV3黑素瘤细胞和HaCaT细胞按照不同比例混合接种于人去表皮的真皮组织上，采用液下培养和空气-液面培养相结合技术进行培养，体外构建组织工程皮肤模型。对所构建的皮肤黑素瘤模型进行常规切片免疫组化观察。
结果与结论：苏木精-伊红染色显示MV3黑素瘤细胞在去表皮真皮表面成层分布或形成瘤灶，HaCaT 细胞和瘤细胞混合生长，形成典型的表皮样结构。部分瘤细胞浸润到去表皮真皮浅层或内部，成瘤灶分布。CK10、CK-pan和S-100免疫组化染色显示阳性。随着MV3∶HaCaT细胞比例的增高，CK10，CK-pan由表层逐渐下移，由层状分布变为团块状分布，S-100蛋白染色则分层逐渐明显，部分区域成瘤状分布。结果可见利用 MV3黑素瘤细胞和 HaCaT 细胞结合去表皮真皮体外可以构建皮肤黑素瘤模型。 -
人羊膜上皮细胞复合去表皮的真皮构建组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损的实验研究
目的 探索由人羊膜上皮细胞(hAEC)、成纤维细胞与去表皮的真皮(DED)构建组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损的可行性.方法 采用低浓度胰蛋白酶多步消化分离法提取hAEC,并用两步酶消化法处理健康小儿包皮,获得成纤维细胞悬液,传代培养.将体外扩增培养至第3～5代的成纤维细胞和第2代hAEC分别接种在DED真皮面和基底膜面,体外器官培养构建组织工程皮肤.取3～4周龄健康雄性裸鼠20只,抽签法随机分为2组,在所有小鼠背部正中制备全层皮肤缺损模型.组织工程组用构建的组织工程全层皮肤覆盖创面;对照组创面仅覆盖凡士林油纱.分别于术后第7、14、21、28天对裸鼠全身及移植部位大体观察,比较两组间创面愈合时间及创面愈合率,并对移植部位行组织学观察.结果 hAEC具有干细胞特征,免疫荧光显示其表达结合转录因子4(0CT-4)、阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4).器官培养2周后,体外构建的组织工程皮肤形成4～9层复层表皮,且表皮的组织结构形态与正常皮肤类似.移植组织工程皮肤至裸鼠创面后肉眼观察显示,在移植后第7、14、21天,组织工程组创面愈合率分别为57.49％±6.11％、92.80％±3.10％、98.83％±0.25％,均明显高于对照组(22.93％±4.26％、54.57％±7.94％、91.16％±4.79％),差异均有统计学意义(n=10,t值分别为27.36、32.23、11.80,均P＜0.001),组织工程组创面愈合时间[(21.51±1.51)d]明显短于对照组[(28.80±1.14)d](n=10,￡=42.23,P＜0.001),且在移植后第28天移植物颜色与自体皮肤颜色接近.组织学观察显示,组织工程组上皮层次清晰,角化明显,真皮层细胞生长良好;对照组移植区上皮较薄且有部分缺损,真皮层次欠佳,且可见炎症细胞浸润.结论 用hAEC、成纤维细胞复合DED构建的组织工程皮肤移植后能在裸鼠体内存活,且创面愈合更佳,可望成为一种较理想的组织工程皮肤.
