您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
VMH蛋白文献资料
-
拟态弧菌VMH蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备
目的 实现拟态弧菌热不稳定性溶血素(VMH)的原核表达,制备兔抗VMH蛋白的多克隆抗体.方法 根据GenBank上已有的拟态弧菌vmh基因序列,设计并合成引物,通过PCR方法扩增vmh基因.PCR纯化产物酶切后,定向插入到PET-32a表达载体构建重组表达质粒PET-32a-vmh.重组表达质粒转化至E.coli Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下进行VMH蛋白表达.SDS-PAGE分析重组VMH蛋白(rVMH)的表达形式,并分别采用兔血平板扩散法和Western blot检测其溶血活性和免疫反应性.用纯化的rVMH蛋白免疫新西兰大白兔,3次免疫后采集免疫血清,采用饱和硫酸铵分级沉淀结合亲和层析法纯化多克隆抗体,并检测其纯度与效价.结果 重组表达质粒PET-32a-vmh诱导表达后,经SDS-PAGE分析发现分子量约为77.8 kDa的rVMH蛋白主要以包涵体形式表达,该蛋白经变性复性后具有溶血活性和免疫反应性.兔抗rVMH蛋白的多克隆抗体经纯化后,其纯度达95％,ELISA效价为1∶26843545600,琼扩效价为1∶32.结论 成功制备了rVMH蛋白及其多克隆抗体,为进一步采用噬菌体肽库筛选技术鉴定VMH蛋白表位提供了物质基础.
