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熊果酸对矽肺大鼠TNF-α和胶原合成的调节作用
目的 观察熊果酸对矽肺大鼠TNF-α含量和胶原合成的调节作用.方法 75只Wistar雄性大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、熊果酸组,每组25只.模型组与熊果酸组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型.熊果酸组自注射SiO2第二天灌胃熊果酸40mg/kg,对照组以同样方法灌注等量生理盐水,共连续28天.动物分别在注射SiO2后第7、14、28天处死.ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量,应用羟脯氨酸试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量,Western blot法检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).熊果酸组TNF-α含量与模型组相比均显著降低(P＜0.05).模型组肺组织中总胶原蛋白含量与同期对照组比较明显增加(P＜0.05).熊果酸组与模型组相比,总胶原含量明显下降(P＜0.05).熊果酸组与模型组大鼠肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原表达与总胶原蛋白含量变化一致.结论 熊果酸可以减少矽肺纤维化过程中TNF-α和胶原蛋白的产生.
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盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠左心室壁心肌细胞和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白变化
目的 探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响.方法 成年大鼠42只按4mg/(kg·d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组.利用电子/光学显微镜观察不同阶段左心室肌组织结构,免疫组织化学和Western blotting方法检测左心室肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白表达,并利用HAPIS-2000显微图像分析系统和SPSS10.0统计学软件对表达强度和面积百分比进行统计学处理.结果 光镜下观察ISO诱导心内膜下出现心肌细胞缺血坏死区.缺血坏死区有Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白高表达,缺血坏死区所占面积百分比有减小趋势,组间比较l周与4周之间差异无统计学意义(P＞0.05),4周与8周间差异具有统计学意义(P＜0.05)；表达强度组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).非缺血坏死区心肌细胞早期表现为大量聚集糖原颗粒,后期以线粒体增多,肌原纤维松散为主要特征；免疫组织化学检测间质I型胶原蛋白所占面积百分比无变化,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；表达强度实验组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但与对照组相比,表达量减小,差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学检测间质Ⅲ型胶原蛋白所占面积百分比呈增多趋势,组间比较,1周与4周间差异具有统计学意义(P＜0.05)；表达强度稳定,组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Western blotting结果显示,实验组间Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白均呈现从增多到减少的趋势,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 ISO长期诱导致心内膜下心肌细胞缺血坏死,且缺血坏死区面积总体趋势变小；缺血坏死区发生纤维化改变,与心壁僵硬度增大相关.非缺血坏死区心肌细胞肥大与能量代谢相关,间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白不参与心室壁僵硬度和顺应性变化.
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膝骨关节炎前交叉韧带Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维定量分析及组织学相关研究
目的 探讨老年膝骨关节炎(OA)前交叉韧带(ACL)退变时Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布、含量与组织学改变特点.方法 选择膝关节OA患者全膝关节置换术中切取的ACL27例(29膝)和正常膝关节新鲜ACL标本5例,采用苦味酸-天狼猩红染色观察并分析ACL中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布、含量和比例改变.HE染色观察ACL的组织学变化.结果 苦味酸-天狼猩红染色发现,正常ACL胶原排列整齐,偏振光下呈横纹肌样排列,主要由Ⅰ、Ⅲ型胶原构成,Ⅰ型胶原粗大,含量较多,在韧带内呈弥漫性分布;Ⅲ型较少,多分布在各束韧带的内部.OA患者的ACL胶原排列紊乱,Ⅲ型胶原含量增多,Ⅰ型胶原明显减少.HE染色组织学观察到OA患者ACL松散,有不同程度的纤维结缔组织变性,表现为不均匀的纤维细胞数目增多或减少,可见黏液变性、软骨样化生、囊性变及玻璃样变性,并有淋巴细胞浸润.结论 苦味酸-天狼猩红染色可以应用于观察并计算ACL中Ⅰ、Ⅲ型胶原的分布与含量的变化.膝关节OA伴有ACL退变时Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布与含量有改变,ACL退变与OA具有相关性.
关键词： 前交叉韧带 骨关节炎 Ⅰ/Ⅲ型胶原 苦味酸-天狼猩红染色 -
激光损伤视网膜后Ⅰ/Ⅲ型胶原基因表达与伤口愈合、纤维化及瘢痕形成的关系
目的探讨激光光凝家兔视网膜后对Ⅰ /Ⅲ型胶原基因表达的影响 . 方法氪激光光凝视网膜后 1、 3、 7、 14 d, 制备眼球冰冻切片 , 应用合成的寡核苷酸探针进行原位分子杂交 , 观察Ⅰ /Ⅲ型胶原 mRNA表达的变化 . 结果激光光凝后 1～ 3 d, 邻近伤口视网膜节细胞层和内核层内Ⅰ /Ⅲ型胶原 mRNA表达明显增多 , 并维持到 7 d以后 . 结论激光损伤视网膜后Ⅰ /Ⅲ型胶原基因呈上调表达 , 与组织损伤修复直接相关 .
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热休克蛋白47(HSP47)-短发夹RNA的构建及其细胞水平对HSP47表达的影响
目的 针对肝纤维化发病关键基因热休克蛋白47 (HSP47)基因构建HSP47-shRNA,初步验证其在NIH/3T3细胞系干预HSP47基因的表达,影响HSP47 mRNA及蛋白水平表达,并观察该细胞功能学变化. 方法 设计HSP47-shRNA模板,并将其分别设计于U6启动子的下游引物,将U6启动子及其下游HSP47-shRNA的模板双链DNA连接入载体,构建HSP47-pGCsi-U6-shRNA重组质粒(HSP47-1-pGC si-U6-shRNA、HSP47-2-pGCsi-U6-shRNA和HSP47-3-pGCsi-U6-shRNA).以非相关干扰质粒作为对照,通过脂质体介导转染HSP47-shRNA至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中,分别于12、24、48和72 h在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率和荧光表达强度;同时于转染后0、24和48 h收集细胞,采用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析HSP47 mRNA和蛋白表达情况;并观察干预后该细胞分泌胶原功能和小鼠转化生长因子(TGF-β1)表达的变化. 结果 成功构建HSP47-shRNA载体,通过脂质体介导转染入NIH/3T3细胞,各干扰质粒转染效率均约为60.0％,各干扰质粒转染效率间差异无统计学意义(P＞0.05).转染12h,可见少量绿色荧光细胞,随转染时间的延长,细胞荧光表达量逐渐增加,各干扰质粒于转染72h荧光表达强.shRNA干扰显著抑制HSP47蛋白的表达,以转染HSP47-1-shRNA 24h后对蛋白表达抑制效果佳,对HSP47 mRNA的相对沉默效率为(25.83±1.79)％,与空白组及非相关对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HSP47-1-shRNA转染24h,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量分别下调为(56.52±1.64)％和(53.48±2.54)％,转染48 h分别下调为(54.17±2.63)％和(50.21±2.34)％,明显低于空白组和非相关对照组(P＜0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P＞0.05).各组HSP47-shRNA干扰质粒对TGF-β1 mRNA的抑制效率以转染24h效果佳,相对表达分别为(63.23±2.18)％、(64.53±3.17)％和(75.19±4.20)％,均低于空白组和非相关对照组(P＜0.01),但干预组间对TGF-β1的抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).各HSP47-shRNA干扰质粒组细胞上清中TGF-β1的抑制率以转染24h为佳,分别为(51.79±3.12)％、(66.67±2.13)％和(69.61±3.65)％,与空白组相比,HSP47-1-shRNA组与HSP47-2-shRNA组对TGF-β1均有显著抑制作用,且以HSP47-1-shRNA组抑制效率更佳(P＜0.05),HSP47-3-shRNA组与空白对照组间差异则无统计学意义(P＞0.05). 结论 构建了HSP47-shRNA干扰质粒,初步证实其对HSP47的表达干预有效,并引起NIH/3T3细胞功能学的变化.
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胰岛素治疗对心肌梗死大鼠胶原重构的影响
目的:研究观察胰岛素治疗对心肌梗死大鼠(myocardial infarction,MI)胶原重构的影响.方法:成年雄性SD大鼠34只,随机分为3组,即假手术(Sham)组(n=6)、生理盐水(NS)对照组(n=14)及胰岛素(ISL)治疗组[n=14,缺血20 min后,通过尾静脉以4ml/(kg·h)的速率输入50 U/L ISL 2 h,并在缺血后l周内,每日皮下注射0.5 U/ml胰岛素1ml/kg体质量].分别于术后1周和4周,行心脏超声心动图(UCG)监测左室射血分数(LVEF),用氯胺T法检测心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,用Western blot检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:术后1周和4周时,对照组的LVEF值较Sham相比明显降低(P＜0.01),而ISL治疗组与对照组相比,LVEF显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与Sham组相比,对照组心肌胶原的含量升高,ISL治疗组可使胶原的含量显著降低(P＜0.05).1周时,对照组的心肌Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值增加,经ISL治疗后,Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值明显下降(P＜0.05)；4周时,对照组Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值增加,而给予ISL治疗后Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值无明显差异.结论:MI后大鼠心肌非梗死区组织出现胶原重构,ISL可影响该过程中心肌Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值,从而起到改善心脏功能的作用.
