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内质网应激激活与依托泊甙和放线菌素D耐药绒癌相关性研究
目的 探讨内质网应激激活与拓扑异构酶Ⅱα介导的依托泊甙( etoposide,VP16)和放线菌素D(actinomycin-D,Act-D)耐药绒癌的关系.方法 采用间断诱导法诱导人绒癌细胞系JEG-3,分别建立绒癌ActD耐药细胞系JEG-3/ActDB1和VP16耐药细胞系JEG-3/VPC1.细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)观察敏感细胞和耐药细胞的生长增殖规律和耐药指数；流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性变化；荧光定量PCR技术分别检测两种不同药物诱导的JEG-3耐药株中拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和内质网应激(ERS)各个通路相关的基因mRNA的表达水平.结果 (1)成功建立了绒癌耐药细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3/VPC1.其耐药指数分别为50.64±10.68和65.87±3.19.耐药株生长速度均较亲本细胞减慢,三者的染色体倍性差异无统计学意义.(2)在两种不同的耐药株中,TopoⅡα的表达水平均明显低于亲本细胞,而与ERS各个通路相关基因均有不同程度的激活.结论 成功建立了针对ActD和VP16耐药的绒癌细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3/VPC1.内质网应激激活可能参与绒癌耐药的发生.
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HLA-G短干扰RNA真核表达载体的构建及其在JEG-3细胞株中抑制HLA-G表达的研究
目的:构建HLA-G短干扰RNA表达质粒及探讨HLA-G的功能.方法:根据siRNA设计的原则,结合pSilencer2.1-U6-neo质粒的特点,针对HLA-G基因设计并合成两对寡聚DNA片段,退火后将其克隆入pSilencer2.1-U6-neo,将重组真核表达质粒pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G采用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株.应用RT-PCR、Western-blot等方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平;MTT法检测转染后JEG-3细胞增殖的变化.结果:RT-PCR和Western-blot结果均表明瞬时转染重组pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达.实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制.结论:pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒构建成功,可下调JEG-3细胞中HLG的表达,抑制绒癌细胞生长.
关键词： 人类白细胞抗原-G基因 RNA 干扰 JEG-3细胞系 -
钙网蛋白在甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌中的作用研究
目的:探讨钙网蛋白(CALR)在对甲氨蝶呤(MTX)耐药的人绒毛膜癌中的作用.方法:采用Western blot印迹和细胞免疫荧光方法检测CALR蛋白在对MTX间断诱导耐药绒毛膜癌细胞株JeG-3/MTXA1与亲本细胞JeG-3中的表达差异,观察利用RNA干扰(RNAi)技术干扰CALR表达后耐药细胞耐药指数的变化.结果:Western blot验证结果,CALR在耐药细胞JeG-3/MTXA1中的表达明显高于亲本细胞JeG-3.细胞免疫荧光结果,在耐药细胞JeG-3/MTXA1中,CALR蛋白表达明显较亲本细胞JeG-3增多,且近核表达增强.经过RNAi后,耐药细胞JeG-3/MTXA1的耐药指数下调74.05％ (33.94±0.68 vs 8.81±1.58),而对细胞增殖无明显影响.结论:CALR蛋白在耐药细胞中明显上调,干扰其表达后耐药细胞可明显降低其耐药指数.CALR可能参与对MTX耐药绒毛膜癌的发生.
