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肠道细菌Akkermansia muciniphila及其与宿主疾病的关系
Akkermansia muciniphila(A.muciniphila)是肠道菌群的重要成员,于2004年首次从人类粪便样品中分离得到.A.muciniphila定植于肠道黏液层,其丰富度与肥胖、Ⅱ型糖尿病等代谢性疾病呈负相关.本文对A.muciniphila的基本特征、在肠道中的分布和变化情况、对宿主健康的影响及其与宿主代谢性疾病、免疫性疾病、肠道癌症、孤独症、酒精性肝病的关系等方面进行综述.
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肠道细菌Akkermansia muciniphila核酸适配体的筛选
目的 筛选能高效特异结合Akkermansia muciniphlia(A.muciniphlia)的核酸适配体,为后续利用适配子进行A.muciniphlia的检测和鉴定奠定基础.方法 合成83bp随机ssDNA文库,运用指数富集配体系统进化技术,筛选A.muciniphlia的核酸适配体,并对其进行序列测定、结构分析、解离常数(KD值)测定及特异性验证.结果 经8轮筛选后,随机ssDNA文库的亲和力从5.23上升56.99,筛选出的适配体富集库经克隆、测序后得到16条不同的核酸序列,根据同源性分成3个家族,终筛选到2条对A.muciniphlia有较高亲和力的高频适配体,相应的KD值分别为34.8nmol/L和12.8nmol/L(P ＜0.05).结论 本文首次筛选出了对A.muciniphlia具有较高亲和力和特异性的适配体,有望用于A.muciniphila的鉴定和检测.
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实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila方法研究
目的 建立实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila (A.muciniphila)的方法,为A.muciniphila的定量检测及深入研究提供技术支持.方法 建立SYBR Green Ⅰ荧光PCR定量检测A.muciniphila的方法,利用A.muciniphila标准品制备标准曲线,评价该方法的灵敏度、特异性、抗干扰性及重复性,并对30例人粪便样本进行检测.结果 标准曲线线性关系良好(R2=0.999);方法灵敏度可达到1.0×102 CFU/mL;该方法可特异性扩增A.muciniphila,不受其他肠道细菌的影响;组内和组间重复性较好,Ct值的变异系数均小于2％;30例人粪便样品中A.muciniphila阳性率为73％,Ct值为17.40～31.77.结论 本研究建立的实时荧光PCR定量检测粪便中A.muciniphila的方法简便、快速、经济,且具有良好的灵敏度、特异性、抗干扰性和重复性,适用于实际粪便样品的检测.
