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靶向乳腺癌的核酸适配体应用研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,实现乳腺癌的早期诊断和早期治疗意义重大.核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)筛选得到的寡核苷酸序列,在肿瘤诊断及治疗方面拥有良好的应用前景.本文对靶向乳腺癌的核酸适配体及适配体作为载体和探针在乳腺癌诊疗中的作用进行综述.
关键词： 乳腺癌 核酸适配体 指数富集配体系统进化技术 诊断 -
穿孔素适配体的筛选及电化学传感器的制备
目的 研发能特异性结合穿孔素的DNA适配体并构建适配体电化学传感器,为发展穿孔素的新型检测技术提供基础.方法 体外合成全长为81个碱基并含有35个随机寡核苷酸的单链DNA文库,库容量大约为1×1010,以穿孔素蛋白为靶标,利用指数富集配体系统进化技术(SELEX),从单链DNA文库中筛选能够结合穿孔素蛋白的DNA适配体;采用M-fold程序(version 3.2)预测二级结构;设计并构建适配体电化学传感器,进行穿孔素电化学特异性检测,绘制标准曲线.结果 经多轮筛选,获得6条穿孔素蛋白的DNA适配体,分别为序列SEQ1~SEQ6,适配体SEQ6能够特异性结合穿孔素,并可通过电化学方法用于检测穿孔素,而其与牛血清清蛋白、γ-干扰素、肿瘤坏死因子α结合较弱.该电化学传感器检测穿孔素的线性水平范围为1~20 nmol,检出限为0.7 nmol.结论 成功利用SELEX筛选获得特异结合穿孔素的DNA适配体,其在研发针对穿孔素的新型检测技术方面具有应用潜能.
关键词： 穿孔素 适配体 指数富集配体系统进化技术 -
肠道细菌Akkermansia muciniphila核酸适配体的筛选
目的 筛选能高效特异结合Akkermansia muciniphlia(A.muciniphlia)的核酸适配体,为后续利用适配子进行A.muciniphlia的检测和鉴定奠定基础.方法 合成83bp随机ssDNA文库,运用指数富集配体系统进化技术,筛选A.muciniphlia的核酸适配体,并对其进行序列测定、结构分析、解离常数(KD值)测定及特异性验证.结果 经8轮筛选后,随机ssDNA文库的亲和力从5.23上升56.99,筛选出的适配体富集库经克隆、测序后得到16条不同的核酸序列,根据同源性分成3个家族,终筛选到2条对A.muciniphlia有较高亲和力的高频适配体,相应的KD值分别为34.8nmol/L和12.8nmol/L(P ＜0.05).结论 本文首次筛选出了对A.muciniphlia具有较高亲和力和特异性的适配体,有望用于A.muciniphila的鉴定和检测.
