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调控脂肪代谢及脂肪细胞分化的转录因子研究进展
脂肪代谢及脂肪细胞分化过程中受多种转录因子的调控,本文综述了过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPs)、固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)、GATA2和GATA3以及肝脏X受体α(LXRα)等转录因子调控脂肪代谢及脂肪细胞分化的研究现状,为研究脂肪代谢及脂肪细胞分化的分子机制提供参考.
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CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析
目的:探讨基因转录水平CCAAT增强子结合蛋白(CEBPs)及其调节基因在肝再生(LR)中的作用.方法:将与肝再生相关的CEBPs家族转录因子输入NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)和RGD(rgd.mcw.edu)等网站查找与其转录功能相关的文献,从中得出大鼠、小鼠和人的CEBPs家族下游基因.然后将人和小鼠基因与大鼠比对,筛选出与大鼠不重复的人和小鼠基因.再将他们与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果进行比对确认,把其中表达上调或下调2倍以上的基因视为有意义变化的大鼠同源基因.用Rat Genome 230 2.0芯片检测他们在大鼠再生肝中的表达情况,用真、假手术比较方法确定肝再生相关基因.结果:27个基因与肝再生相关,其中11个基因表达上调,6个基因表达下调,10个基因在有的时点表达上调,有的时点表达下调(简称上/下调表达).他们的上调范围为对照的2-128倍,下调范围为对照的2-16倍.肝再生启动[部分肝切除(PH)后0.5-4 h]、G0/G1过渡(PH后4-6h)、细胞增殖(PH后6-66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168 h)等4个阶段起始表达的基因数分别为18,3,8和1;基因的总表达次数分别为18,11,25和16.表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用.他们共表达上调126次,下调76次.表明肝再生中表达上调基因多于表达下调基因.结论:CEBPs及其调节的基因与肝再生中细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、炎症反应、应激反应、脂类代谢和细胞外基质变化等密切相关.
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香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖作用的研究
目的：探讨香烟提取物（CSE）对人气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖以及钙网织蛋白（CRT）、CCAAT增强子结合蛋白α（CEBPα）表达的影响及机制。方法（1）通过收集经不同浓度CSE处理24 h的ASMCs，分为对照组、2.5%CSE组、5%CSE组、10%CSE组。以MTT法分析各组细胞增殖情况，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞CEBPα的mRNA水平；免疫印迹法检测4组细胞CRT、CEBPα的蛋白水平。（2）在10%CSE组，分别在ASMCs中转染阴性对照siRNA、CRT的siRNA，比较2组ASMCs的CEBPα、CRT表达及细胞增殖情况。结果（1）对照组、2.5％CSE组、5％CSE组、10％CSE组ASMCs的CEBPα蛋白表达依次递减，CRT和细胞增殖程度呈依次增高（P＜0.05）；而CEBPαmRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）在10％CSE作用下，CRTsiRNA组中ASMCs的CEBPα表达较阴性对照siRNA组增强（P＜0.05），而CRT和细胞增殖程度均较相应阴性对照siRNA组减弱（P＜0.05）。结论 CSE可使ASMCs中CRT的表达增强，从而抑制CEBPαmRNA的翻译，使CEBPα的表达减少，终促进ASMCs的增殖。
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人参皂甙Rb1促进3T3-L1脂肪细胞分化并抑制脂解
目的 观察人参皂甙Rb1(Rb1)对3T3-L1脂肪细胞分化和脂肪分解的作用,并探讨人参抗糖尿病的作用机制.方法 在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中,分别加入不同浓度的Rb1作用6 d,各组脂肪细胞分别进行油红O染色,甘油三酯(TG)含量、3H-葡萄糖转运率检测,并用实时定量PCR和免疫印迹对脂肪细胞PPARγ2、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白(ap2)和葡萄糖转运体(Glut)1、Glut4的mRNA和蛋白水平进行测定;运用表面等离子体共振技术(SPR)测定Rb1与PPARγ结合亲和力;在分化成熟的脂肪细胞加入Rb1孵育后,测定释放到上清液的甘油含量.结果 Rb1能促进3T3-L1脂肪细胞的分化程度,并呈剂量依赖关系,10μmol/L浓度使细胞内TG含量增加约56%,同时PPARγ2和C/EBPα的mRNA和蛋白水平均显著升高,其下游基因ap2的mRNA水平也明显增加.分化过程中加入Rb1的脂肪细胞基础和胰岛素介导的葡萄糖转运率增加.Glut4的mRNA和蛋白水平均上升,而Glut1则未见显著变化;SPR检测结果显示Rb1具有PPARγ结合活性,提示Rb1是PPARγ的配体;在诱导分化成熟的脂肪细胞中,Rb1抑制基础脂肪分解,10μmol/L浓度使上清甘油含量下降约50%,但对异丙肾上腺素介导的脂解没有影响.结论 Rb1作为PPARγ的配体,通过上调PPARγ2、C/EBPα的表达促进脂肪细胞的脂肪形成;增加基础和胰岛素刺激的葡萄糖利用;同时抑制基础脂解.以上结果表明人参和人参皂甙抗糖尿病的作用可能与促进脂肪细胞分化,增加胰岛素敏感性和抑制基础脂解有关.
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CCAAT/增强子结合蛋白α对K562细胞分化和凋亡的影响及其机制
目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点.方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株.Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per 2、cyclin B1和C-myc的表达.结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562.与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),同时出现细胞凋亡峰.细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per 2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达.结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的.
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CCAAT增强子结合蛋白β在胃癌中的表达及其临床意义
目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPB)在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理参数及预后的关系.方法 用免疫组织化学染色方法对81例胃癌组织及其配对癌旁黏膜组织中CEBPB蛋白的表达进行检测,并分析其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系.结果 CEBPB蛋白主要定位于细胞核,在胃癌组织中表达阳性率为16％(13/81),癌旁组织中无表达或弱表达.单因素分析显示,CEBPB阳性表达与胃癌远处转移有关(P=0.048).CEBPB阳性表达患者中位生存期19.4个月,低于CEBPB阴性表达患者的45.2个月(P=0.024).多因素分析显示,CEBPB阳性表达是影响本组胃癌患者的独立预后因素(HR=2.544,95％CI:1.154～5.610,P=0.021).结论 CEBPB在胃癌组织中表达增高提示预后不良.
关键词： 胃肿瘤 CCAAT增强子结合蛋白 高表达 预后 -
C/EBPα对糖尿病肾病足细胞保护作用的研究
目的 构建足细胞C/EBPα条件性敲除小鼠,进一步构建糖尿病肾病模型,研究C/EBPα敲除后对糖尿病肾病足细胞的影响及机制.方法 将C/EBPαloxp/loxp与podocin-cre小鼠进行杂交,得到F1代杂合子后继续繁殖直至得到纯合子小鼠(C/EBPαf/f).分别通过常规喂养或45％高脂饮食喂养25周,并用低剂量链脲佐菌素(STZ,100 mg/kg)处理小鼠后构建糖尿病肾病模型,检测小鼠血尿生化指标以及观察各组肾脏组织形态学改变,并检测肾组织纤维化、氧化应激调控因子和线粒体功能相关蛋白的表达.结果 成功构建足细胞C/EBPα特异性敲除小鼠,并在此基础上成功构建2型糖尿病肾病模型.8月龄的C/EBPαf/f小鼠肾脏无明显组织形态学异常,但糖尿病肾病的C/EBPαf/f小鼠具有明显的肾脏损伤、炎症和氧化应激反应.与野生型糖尿病肾病小鼠相比,糖尿病肾病C/EBPαf/f小鼠Nephrin和E-cadherin表达极度降低(均P＜ 0.01),Fibronectin显著升高(P＜0.01),Nrf2显著升高(P＜0.05),Keap1降低(P＜0.05),且磷酸化AMPK水平降低(P＜0.05),线粒体功能相关基因Pgc-1α也显著降低(P＜0.05).结论 足细胞C/EBPα基因敲除通过促进纤维化并抑制Pgc-1α介导的线粒体抗氧化功能加重糖尿病肾病.
关键词： 糖尿病肾病 足细胞 小鼠 基因敲除 CCAAT增强子结合蛋白 -
乌司他丁对周围神经损伤后脊髓神经元凋亡及CCAAT增强子结合蛋白表达的影响
目的 探讨乌司他丁对周围神经损伤后脊髓神经元凋亡及CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)表达的影响. 方法 将225只健康雄性SPF级C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、周围神经损伤组和乌司他丁组,每组75只.后2组制备单侧坐骨神经损伤模型,造模成功后乌司他丁组腹腔注射乌司他丁溶液0.2 mL(10 000 U/kg),假手术组和周围神经损伤组给予等容量生理盐水,1次/d,连续3d.分别于术后1、3、7、14、28 d取小鼠脊髓L4-6节段,采用HE染色观察组织病理学变化,采用TUNEL法检测神经元凋亡并计算神经元凋亡指数(AD,采用Western blotting检测CHOP、Bcl-2、Bax、活化型Caspase-3蛋白表达并计算Bcl-2/Bax比值,采用RT-PCR检测CHOP mRNA表达. 结果 HE染色显示周围神经损伤组脊髓损伤较假手术组明显加重,而乌司他丁组脊髓损伤较周围神经损伤组明显减轻.术后1、3、7、14、28 d时,与假手术组比较,周围神经损伤组和乌司他丁组神经元AI明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低,活化型Caspase-3及Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2/Bax比值明显降低,CHOP蛋白及mRNA表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与周围神经损伤组比较,乌司他丁组神经元AI明显降低,Bcl-2蛋白表达明显升高,活化型Caspase-3及Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值明显升高,CHOP蛋白及mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 乌司他丁对周围神经损伤后脊髓损伤的保护作用与其降低CHOP表达、抑制脊髓神经元凋亡有关.
关键词： 乌司他丁 CCAAT增强子结合蛋白 细胞凋亡 周围神经损伤 脊髓损伤
