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肥胖亚型和非肥胖亚型2型糖尿病患者血浆蛋白质组学分析
目的 利用OFFGEL电泳-差异蛋白质组学法,比较肥胖亚型和非肥胖亚型糖尿病患者的差异蛋白,进一步阐释并比较肥胖亚型和非肥胖亚型糖尿病的形成机制.方法 分别选择18 ～44岁男性肥胖亚型、非肥胖亚型2型糖尿病患者及健康对照样本各10例；血浆样品经高特异性免疫亲和法去除白蛋白和IgG后,进行溶液酶切,对多肽混合样品进行OFFGEL电泳；利用Nano HPLC-Chip-MS/MS系统对按等电点分离的多肽样品进行进一步分离和质谱鉴定,比较3组样本中的差异蛋白质,并进行功能注释和机制探讨.结果 肥胖亚型、非肥胖亚型糖尿病患者组和对照组分别鉴定391、415、371种蛋白质,组间差异蛋白质比较和蛋白质注释结果表明脂联素在肥胖亚型糖尿病患者血浆中低表达,基质交感分子1在肥胖亚型糖尿病患者血浆中高表达；丝氨酸蛋白激酶ATM、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶WNK1等6种蛋白激酶在非肥胖亚型糖尿病患者血浆中表现出高表达.结论 脂联素、基质交感因子1和一系列蛋白激酶在肥胖亚型、非肥胖亚型糖尿病的发病机制上可能存在差异.
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双向凝胶电泳在临床血浆蛋白质组学研究中的技术难点和解决方法
随着双向电泳技术中固相化pH梯度的发明、电喷雾质谱、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术的应用,蛋白质组学技术已经越来越多的应用于疾病的研究中.临床蛋白质组学已经成为目前医学研究中的热点[1].血液标本因取材简便、应用价值高,因此血浆蛋白质组学具有应用前景,并成为临床蛋白质组学研究中关注的重要问题.
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血浆蛋白质组学在2型糖尿病研究中的应用
蛋白质组( proteome)的概念首先由澳大利哑学者Wilkins等[1]于1994年首次提出,源于蛋白质( protein)和基因组的(genome)的整合,指一个细胞内存在的全部蛋白质.蛋白质组学作为功能基因组学的重要核心及“后基因组时代”生命科学研究的中心领域,任务是深化认识基因组中所包含全部基因的功能,关注完整的生物个体一种细胞内所有的蛋白质在特定的时间或特定的环境条件下表达的变化,以期达到寻找能够干预此种变化的特定靶位或基因.研究表明,血浆中蕴含了大量丰富多变的蛋白质,且具有一系列重要的生理功能,是人类“大”和“深”的蛋白质组[2],目前研究还显示,在疾病的发生发展过程中,血浆会产生差异表达的蛋白质,而血浆中特定蛋白质浓度的变化往往对疾病的发生发展有着重要的预警作用[3].因此,通过血浆蛋白质组学这一研究手段对生物体进行定量及动态的检测,对揭示疾病的发病机制、发现分子标志物、进行早期诊断及个体化治疗均具有重要意义.目前,随着蛋白质组研究技术的不断发展和生物信息学的不断完善,蛋白质组学已经广泛应用于肿瘤、心血管疾病等重大疾病血清的研究之中,然而其在2型糖尿病( T2DM)及其并发症的研究中尚处于起步阶段.本文就血浆蛋白质组学在T2DM研究中的应用作一综述.
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丹七片干预心肌缺血的血浆蛋白质组学研究
目的：探讨丹七片干预心肌缺血的作用机制。方法缩窄环法制备小型猪心肌缺血模型，给予丹七片每次9 g /（只?天）临床等效剂量，4周。双向凝胶电泳质谱联用法分析血浆蛋白表达谱变化。结果与模型组比较，丹七片下调蛋白点9个（丰度比值≤0．5）、上调蛋白点11个（比值≥1．5）。鉴定出的上调蛋白为载脂蛋白 A1和载脂蛋白 E。结论通过上调载脂蛋白 A1和载脂蛋白 E抑制缺血心肌过度的炎症反应，可能是丹七片干预心肌缺血的主要机制之一。
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血浆蛋白质组学在中医证候研究中的应用探讨
证候一直是中医学术研究的核心内容,其整体、动态等特性与血浆蛋白质组学相似,故将后者应用到证候研究中将很可能解决"证"本质的问题,促进中医现代化进程.
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中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳方法的建立及优化
目的 建立中医证侯血浆蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)方法并对其进行优化.方法 以正常人血浆样品为研究对象,对白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品、全血浆和热SDS法全血浆样品进行pH梯度2-DE分离,凝胶经硝酸银染色后,利用PDQuest软件对2-DE图谱进行重复性分析,并对不同处理方法的全血浆2-DE图像的结果进行比较.结果 与全血浆直接上样2-DE凝胶图谱比较,白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆上样双向电泳蛋白有所增多,但由于白蛋白/IgG球蛋白去除过程中的非特异性吸附,造成了同一样品在蛋白质图谱上的明显差异；与全血浆直接上样和白蛋白/IgG球蛋白去除后血浆样品上样2-DE凝胶图谱比较,热SDS法处理血浆样品可以得到更多的蛋白质,且重复性好(P＜0.05),凝胶硝酸银染色显示蛋白质点染色深、分散清楚.结论 热SDS法全血浆上样2-DE分析法具有蛋白丢失少、操作简便、重复性好的特性,是证侯血浆蛋白质组学研究的有效手段.
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亚健康肾阴虚证的血浆蛋白质组学初步研究
目的:初步观察亚健康肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨亚健康的发生机制奠定基础.方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离亚健康肾阴虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQuest 软件对凝胶图象进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDL-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF);通过Mseot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质.结果:获得了重复性和分辨性较好的血浆双向凝胶电泳图谱;在亚健康肾阴虚证血浆较正常人血浆表达量升高的蛋白质斑点11个,表达量降低的蛋白质斑点6个;选取其中表达量升高相差10倍以上的3个蛋白质斑点进行PMF鉴定,得到1个匹配精确的蛋白质(热休克蛋白27).结论:亚健康肾阴虚证血浆与正常人血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对亚健康的发生机制进行阐释,并将促进中医证候研究的拓展和深入.
