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BDNF基因转染神经干细胞移植脑损伤大鼠移植细胞存活率和 Trkβ、Erk1／2、Ras及 Trx 的表达
目的：探讨脑源性神经营养因子基因修饰神经干细胞（ BDNF／NSCs）移植大鼠创伤性脑损伤（ TBI）模型后，对移植细胞存活数量的影响及其机制。方法采用Feeney法制备TBI模型，于造模后72 h，随机分为两组：BDNFN／SCs 移植组及NSCs移植组，将3μL（1×108／mL）BDNF／NSCs或NSCs直接移植于脑损伤区。分别于移植后1、2、3和4周取脑组织，冻存或制备冰冻切片。在荧光显微镜下计数移植细胞存活数量，并采用免疫组织化学技术检测p－Erk1／2、Ras蛋白的表达；通过RT－PCR技术检测脑损伤区及周围组织中Trx、Trkβ基因的表达。结果 BDNF／NSCs组和NSCs 组细胞存活数随移植时间延长而减少，在移植后的不同时间点，BD-NF／NSCs组移植细胞存活率均明显高于NSCs 组（P＜0．05）；BDNF／NSCs组在移植后不同时间点移植细胞的p－Erk1／2、Ras蛋白表达强度均明显高于NSCs组（P＜0．05）；与NSCs组比较，BDNF／NSCs组损伤灶及周围脑组织中Trx、Trkβ基因的表达水平均明显增强（ P＜0．05）。结论 BDNF基因转染NSCs移植大鼠TBI后，能够明显提高移植细胞的存活率，上调Trkβ、p－Erk1／2、Ras及Trx的表达。 BDNF与其受体Trkβ结合后，可能通过Ras／Raf／Erk途径激活其下游的Trx基因从而激活细胞的抗氧化作用，进而减少移植细胞的氧化损伤，提高移植细胞在脑组织损伤区的存活率。
关键词： 脑源性神经营养因子 神经干细胞 创伤性脑损伤 Ras/Raf/Erk -
PAQR3增强乳腺癌细胞SK-BR-3的表柔比星敏感性
目的 探讨PAQR3增强乳腺癌细胞对表柔比星的敏感性.方法 采用Real-time PCR比较ER、PR及HER2受体不同的4株乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF7、SK-BR-3及T47D)的PAQR3表达情况.在乳腺癌细胞SK-BR-3中转染人源性PAQR3全长表达质粒,设立对照组,观察比较转染PAQR3细胞组与空载质粒细胞组对表柔比星的敏感性,分别计算其所对应的IC50.通过细胞凋亡检测、Western blot探讨PAQR3增加表柔比星敏感性的机制.结果 在4株乳腺癌细胞中,受体三阴性细胞MDA-MB-231的PAQR3表达量高,SK-BR-3与MCF7表达量相对较低；SK-BR-3过表达PAQR3后,其对表柔比星的化疗敏感性显著升高,IC50显著降低[(25.33±0.94) μg/mL vs(17.72±1.11) μg/mL,P＜0.05]；PAQR3本身并未促使SK-BR-3凋亡,实验组与对照组的凋亡率差异并无统计学意义(P＞0.05).但在同等浓度表柔比星的作用下,PAQR3促使SK-BR-3表达凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-7,从而导致表柔比星抑制率增加,对CleavedCaspase-3、Bcl-2、Bcl-xL表达则无影响.进一步分析发现,PAQR3可抑制乳腺癌化疗中表柔比星所致的ERK活化,因而促使乳腺癌细胞对表柔比星敏感.结论 PAQR3可提高乳腺癌细胞对表柔比星的化疗敏感性,PAQR3表达可能与乳腺癌对表柔比星的敏感性相关.
关键词： 乳腺癌 PAQR3 表柔比星 Ras/Raf/Erk 化疗敏感性
