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Red/ET重组文献资料
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小鼠性激素结合球蛋白条件基因打靶载体的构建
目的:构建小鼠性激素结合球蛋白(Shbg)条件基因打靶载体。方法运用ET克隆的方法构建Shbg基因第4?7号外显子两侧插入loxp位点的条件性剔除载体。首先以BAC DNA为模板克隆出Shbg及其上、下游基因并打靶质粒载体(pBR322?MK?AB),利用该质粒和BAC克隆,通过同源重组方式,获得套取质粒(pBR322?Shbg?Re);再分别以PL452及PL451为模板扩增出含Neo片段,经过再一轮的Red/ET重组成功实现条件性基因敲除打靶载体(pBR322?MK?SHBG?cko)的构建。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBR322?MK?AB、pBR322?Shbg?Re、SHBG?Ln重组质粒和Shbg条件基因打靶载体(pBR322?MK?SHBG?cko)结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Shbg条件基因打靶载体,为后续Shbg基因条件敲除小鼠模型的构建奠定了基础。