首页 > 文献资料
-
ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫对CD28/CD86表达及Th1/Th2极化的影响
目的 探讨上调可诱导共刺激分子(ICOS)信号对感染日本血吸虫小鼠CD28/CD86的表达及Th 1/Th2极化的影响.方法 建立ICOS转基因(IC OS-Tg)小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型,应用流式细胞术分析感染前(0周)和感染后(4～20周)小鼠的脾CD4+T淋巴细胞上CD28与脾CD19+B淋巴细胞上CD86的表达水平.应用免疫组化法检测同期小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞上CD28、CD86表达水平变化.取同期小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72 h后,采用ELISA法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(I L-4、IL-13)细胞因子表达水平.采集同期小鼠的血清,应用ELISA法检测血清中SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平.应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化.结果 ICOS-Tg小鼠脾CD4+T细胞上CD28和脾CD19+B细胞上CD86的水平与同期野生型FVB/NJ小鼠相比明显升高,且分别在感染4周后(50.57±7.54 vs 40.38±5.43,P＜ 0.05)及在感染12周后(76.46±10.55 vs 65.10±10.17,P＜ 0.05)差异显著.ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿的CD28、CD86表达亦高于野生型FVB/NJ小鼠的水平,且分别在感染7周后(0.485±0.094 vs 0.357±0.078,P＜0.05)及感染12周后(0.649±0.072 vs 0.537±0.064,P＜ 0.05)差异显著.ICOS-Tg小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13)水平从感染7周后比野生型FVB/NJ小鼠显著升高(皆P＜0.05)；IC OS-Tg小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著高于野生型FVB/NJ小鼠的水平(P＜0.05、0.01、0.001不等)；ICOS-Tg小鼠Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦高于野生型小鼠,分别在感染7、12、16、20周后(P＜ 0.05、0.001)及12、16周后(皆P＜0.05)具有显著性差异.在整个病程中,ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型FVB/NJ小鼠.结论 感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠CD28、CD86表达及其Th2免疫应答显著上调,并伴随肝虫卵肉芽肿病变增强,表明ICOS信号对CD28-CD86信号通路具有一定的调控作用,且在介导Th2极化及肝虫卵肉芽肿的发生、发展中发挥重要作用.
-
日本血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB多价疫苗免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成中TNF-α表达的影响
目的 观察血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB多价疫苗对小鼠肝脏虫卵肉芽肿中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α;TNF-α)表达的影响.方法 55只昆明小鼠随机均分为pVAX1/空质粒组、pVAX1/SjRPS4组、pVAX1/SjCB组、pVAX1/SjRPS4·CB组和PBS对照组,各组小鼠分别于左腿股四头肌注射100 μg 相应重组质粒,PBS组注射100 μl PBS.每隔2周加强免疫1次,共3次.末次免疫后2周每鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴(20±1)条.感染后6周剖杀小鼠,分离肝脏,运用免疫组化和原位杂交法检测TNF-α蛋白和TNF-α mRNA的表达情况.结果 多价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB组TNF-α mRNA和蛋白在肝虫卵肉芽肿中的染色评分得分(9.00±2.17,9.13±2.33),均明显高于pVAX1/SjCB组(6.33±3.06,9.13±2.33),pVAX1/SjRPS4(6.00±3.30,6.53±2.50)单价疫苗组和pVAX1空质粒组(0.67±0.72,0.93±0.59)以及PBS(0.00±0.00,0.00±0.00),P＜0.05.结论 多价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB组TNF-α mRNA和蛋白信号呈棕黄色、棕褐色,主要位于肝脏虫卵肉芽肿周围.以强阳性表达为主.TNF-α表达上调可能是pVAX1/SjRPS4·CB多价疫苗免疫机制之一,能加强宿主的Th1型免疫反应,产生比单价疫苗更好的免疫效果.
-
ICOSL敲基因小鼠日本血吸虫病模型的免疫应答及其免疫病理
目的 观察ICOSL敲基因(ICOSL knockout,ICOSL-KO)小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应.方法 建立ICOSL-KO小鼠及野生型C57BL/6J小鼠日本血吸虫病模型,收集感染前(0周)和感染后(4～20周)的小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72小时后,采用ELISA双抗夹心法检测培养上清中Th1(IFN- γ、IL-12)及Th2 (IL-4、IL-10、IL-13)细胞因子表达水平.应用ELISA法检测同期血清中SEA特异性抗体IgG、及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平.应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变.结果 ICOSL- KO小鼠Th1细胞因子IFN-γ、IL- 12表达明显高于野生型小鼠,而其Th2型细胞因子(IL-4、IL- 10、IL- 13)表达水平却显著低于野生型小鼠.ICOSL- KO小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著低于野生型C57BL/6J小鼠的水平,其Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦低于野生型小鼠的水平,特别是在感染7、12、16周后具有显著性差异.且ICOSL- KO小鼠的肝脏虫卵肉芽肿病变显著小于野生型小鼠.结论 感染日本血吸虫的ICOSL-KO小鼠Th2免疫应答显著下调并导致肝虫卵肉芽肿病变减弱,表明ICOS- ICOSL信号通路在血吸虫病免疫病理中具有重要作用.
