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宫颈癌发病机制的探讨
目的:探索宫颈癌发病的潜在机制,并筛选预测其发病风险的生物学标记物,为宫颈癌的防治提供理论依据.方法:采用基因集富集分析方法对NCBI GEO数据库中21例宫颈浸润性鳞状细胞癌标本和10例正常宫颈上皮标本的表达谱进行比较研究,分析其在信号通路中的富集特征与核心富集基因.利用功能方面的基因本体学和结构方面的染色体位置相关的基因集富集分析,进一步探讨宫颈癌的特征.结果:宫颈癌在DNA损伤修复和细胞周期调控相关通路中出现显著富集特征.其中显著富集的是ATM信号通路(P＜0.001),核心富集基因包括MRE11A、CDC25A、BLM、SMC1A、MDC1、H2AFX和BRCA1等.在生物学功能上出现内切酶活性相关基因集的显著富集(P=0.002).差异性基因主要定位在染色体3q27区域(P=0.007).结论:宫颈癌发病机制与DNA损伤修复和细胞周期调控密切相关,这些通路和相关基因有望成为预测宫颈癌发病风险的生物学标记物.
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miR-1246增强宫颈癌细胞辐射敏感性的分子机制研究
目的:探讨微小RNA-1246(miR-1246)过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制.方法:运用脂质体2000将miR-1246模拟物(miR-1246 mimic)转染4种宫颈癌细胞系HeLa、CaSki、C33A和SiHa,以阴性对照模拟物(NC-mimic)为阴性对照.Real-time PCR检测宫颈癌组织、正常组织、子宫内膜上皮细胞系ESC和4株宫颈癌细胞中miR-1246的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后运用MTT法和Transwell法分别测定细胞活力和细胞迁移能力;运用免疫荧光法检测γH2AX表达水平;Western blot检测细胞中γH2AX、ATM、p-ATM和p-p53的蛋白水平.结果:miR-1246在正常组织和ESC细胞中高表达,而在4株宫颈癌细胞和宫颈癌组织中低表达;转染miR-1246 mimic后miR-1246表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P<0.05).相同条件下,辐照后miR-1246过表达组宫颈癌细胞活力显著低于NC-mimic组,细胞迁移率明显降低(P<0.05).免疫荧光结果显示,miR-1246过表达显著增强电离辐射诱导的γH2AX激活(P<0.05);Western blot结果显示,与NC-mimic组比较,miR-1246过表达显著促进电离辐射诱导γH2AX蛋白的表达,减低p-ATM和p-p53的蛋白水平(P<0.05).结论:miR-1246在正常组织和子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中低表达;miR-1246过表达抑制宫颈癌细胞活力和迁移能力,并可能通过阻断ATM通路、抑制DNA损伤修复而增强宫颈癌细胞的辐射敏感性.
关键词： 宫颈癌 微小RNA-1246 辐射 细胞迁移 ATM信号通路 -
ATM信号通路抑制剂ETP46464对替莫唑胺治疗脑胶质瘤化疗的增敏作用
目的:研究ATM信号通路抑制剂ETP46464对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗脑胶质瘤(glioma)的化疗增敏作用.方法:CCK-8法测定细胞生存曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡蛋白表达.结果:CCK-8结果显示:TMZ单药组与对照组相比较,随着TMZ药物浓度的增加,光密度(OD)值降低,细胞存活率下降,且均低于对照组;TMZ联合ETP46464组与相同浓度TMZ单药组相比较,细胞存活率随TMZ浓度的增加而降低,且低于相同浓度TMZ单独作用下的细胞.流式检测细胞凋亡结果显示:相同浓度TMZ的条件下,TMZ联合 ETP46464组脑胶质瘤 U87细胞的凋亡率明显高于 TMZ单药组;相同浓度ETP46464(0或10 μmol/L)的条件下,随TMZ浓度的增加,细胞凋亡率增加,结果有统计学差异.Western blot结果显示:TMZ单药组磷酸化Chk2(pChk2)表达高于TMZ联合ETP46464组磷酸化Chk2的表达.结论:ATM信号通路抑制剂ETP46464可能通过阻断磷酸化Chk2的表达,阻断ATM信号通路,从而阻止脑胶质瘤细胞化疗所致DNA损伤的修复,在替莫唑胺治疗脑胶质瘤中达到化疗增敏的作用,提高临床脑胶质瘤化疗有效率.
