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47株结核分枝杆菌利福平耐药决定区基因突变特征的研究
目的 了解吉林省结核分枝杆菌的利福平耐药决定区(RRDR)基因突变特征.方法 结核分枝杆菌(MTB)分离自2008-2009年吉林省临床肺结核病人的痰液标本,培养方法为改良酸性罗氏(L-J)培养基.分离出的抗酸杆菌经对硝基苯甲酸(PNB)培养基初步鉴定后选出结核分枝杆菌复合群并应用比例法进行药敏试验(DST).根据DST结果,选择22株利福平耐药株、22株利福平敏感株以及3株临界值标本进行聚合酶链式反应(PCR)扩增rpoB中包含RRDR在内的部分基因,阳性DNA片段通过基因测序以及Bioedit软件分析方法比对基因突变情况.结果 22株利福平耐药株中,16株同时对异烟肼耐药；22株利福平敏感株中,1株异烟肼耐药.利福平耐药菌株中,95％(21/22)的菌株在利福平耐药决定区RRDR发生了基因突变,其中第531位密码子突变频率占50％,第526位占27％,第533位占9％,第516位及513位均为4.5％；22株利福平敏感株中,RRDR区全部无基因突变发生；3株临界值标本中,1株在第531位密码子发生了基因突变,1株在533位发生基因突变,后1株无突变.结论 RRDR区点突变的发生与利福平耐药高度一致；异烟肼耐药与利福平耐药高度相关.
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吉林省耐多药结核分枝杆菌rpoB基因突变特征分析
目的 分析吉林省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征,为耐多药结核病快速诊断方法的建立提供科学依据.方法 采用DNA测序技术对吉林省287株耐多药结核分枝杆菌进行rpoB基因序列检测,分析检测菌株rpoB基因突变特征.结果 287株耐多药结核分枝杆菌中201株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因发生突变,突变率为70.03％ (201/287).碱基突变发生在前3顺位的是rpoB 531(39.72％)、rpoB 526(18.82％)、rpoB 516(5.92％).287株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因共发现碱基突变、缺失、插入等40种基因突变类型.其中,单位点碱基突变、双位点碱基突变、多位点碱基突变、碱基缺失、碱基插入的发生率分别为60.63％ (174/287)、6.27％(18/287)、1.39％(4/287)、1.39％ (4/287)、0.70％(2/287).结论 吉林省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药相关基因常见突变为rpoB 531、rpoB 526和rpoB 516.
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细菌对利福平耐药机制研究进展
利福霉素为袢霉素类家族成员,可用于治疗多种感染,如结核病、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染、艰难梭菌引起的艰难梭菌相关性腹泻(Clos-tridiumdifficile-associated diarrhea,CDAD)、衣原体的持续感染[1]、旅行者腹泻[2]等.然而,利福霉素广泛用于临床感染治疗的同时,细菌耐药问题却使该杀菌"利器"变得"钝化".结核分枝杆菌极易对利福平(rifampin,RIF)耐药,约有3 .6% 新增结核病和20.2% 复治结核病为耐多药结核病[3].CDAD是成人医院获得性腹泻的主要原因[4],利福霉素类中利福昔明因其口服不易被吸收,用于治疗复发性CDAD[5],然而艰难梭菌对利福霉素耐药率高达11% [6].如何在正常发挥药物抗菌作用的同时减少细菌耐药的产生,关系临床抗感染治疗的成败.本文在介绍RIF抗菌机制的基础上,对细菌耐RIF的机制予以综述,为临床开发新的细菌转录抑制剂类药物提供帮助,以便更加有效的治疗感染.
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广西百色地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征分析
目的：分析百色地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因 rpoB的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测利福平耐药性,PCR 技术检测耐药结核分枝杆菌 rpoB基因序列并测序分析利福平耐药相关基因 rpoB的突变特征。结果分离培养获得98例 MTB,98例 MTB出现36株利福平耐药,耐药率为36.73%,36株耐利福平菌株中有27株 rpoB基因发生突变,基因突变率为75.00%,其中516位点突变率为3.70%(1/27),531位点突变率为59.26%(16/27),526位点突变率为29.63%(8/27),533位点突变率为7.41%(2/27)。突变热点依次为 rpoB531、rpoB526和 rpoB533。结论百色地区耐利福平结核分枝杆菌耐药性产生的主要分子机制是因为 rpoB的基因发生突变。
