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真核表达载体pcDNA3.1(±)文献资料
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人白细胞介素12双亚基共表达载体的构建及表达
目的:为了基因治疗研究的需要构建人白细胞介素12(hIL-12)双亚基基因共表达质粒[(P(+)/IL-12)],比较它与单个亚基基因表达质粒[P(+)/P40和P(-)/P35]1∶1共同转染肝癌细胞HepG2后48小时表达结果.方法:分别克隆hIL-12 P40、P35亚基cDNA全长至pcDNA3.1(±)中构建P(+)/P40和P(-)/P35,再将两者串联克隆至pcDNA3.1(+)中构建P(+)/IL-12.脂质体转染3种质粒至肝癌细胞HepG2,48小时后抽取细胞总RNA做半定量RT-PCR,同时取细胞上清做ELISA及Western杂交,结果进行比较分析.结果:两种转染方式均可以表达hIL-12蛋白质且半定量RT-PCR显示较未转染组hIL-12的mRNA水平均增加;转染后48小时P(+)/IL-12组细胞培养上清hIL-12表达量较[P(+)/P40和P(-)/P35]按1∶1比例共同转染组显著增高(P＜0.05).结论:人白细胞介素12双亚基基因串联共表达质粒[P(+)/IL-12]能够转入HepG2并表达hIL-12蛋白质,并且转染后48小时hIL-12表达量较单个亚基基因表达质粒[P(+)/P40、P(-)/P35]1∶1共转染者显著高.
