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IMPACTTM-CN系统文献资料
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Fas死亡信号激发域cDNA的克隆、表达及体外生物学效应
目的:克隆及表达Fas死亡信号激发域(Fas Activation Domain,FasAD)片段,获得具有生物学活性的Fas AD多肽.方法:应用半巢式逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Fas死亡信号激发域cDNA片段,构建Intein表达型原核表达载体FasAD-pTYB12,应用IMPACTTM-CN系统表达及进行一步法亲合层析分离、纯化FasAD多肽.结果:DNA序列测定显示克隆的FasAD cDNA碱基排列顺序与Genebank(M67454)所示完全一致.重组表达载体FasAD-pTYB12经IPTG诱导,成功表达可溶性融合蛋白,进一步分离、纯化获得分子量约5 000的FasAD多肽,Westem blot显示FasAD多肽能被兔抗人Fas多抗识别.初步的生物学活性鉴定显示,该FasAD多肽抑制rhFasL诱导的细胞凋亡的生物学活性高可达70%.结论:可利用IMPACTTM-CN系统制备Fas死亡信号激发域的小分子量多肽,为深入研究Fas结构与功能的关系及与配体的相互作用提供了相关的实验基础,为进一步开发相关的生物免疫调节剂提供了实验依据.
关键词： Fas死亡信号激发域 IMPACTTM-CN系统 基因重组
