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单个B细胞制备CRP单克隆抗体及其ELISA检测体系的初步建立
目的:用单个B细胞抗体制备技术结合Exip293真核表达系统制备hs-CRP单克隆抗体.方法:用重组CRP蛋白免疫小鼠,荧光标记探针和流式分选技术分离出表达CRP单克隆抗体的单个B细胞,通过PCR方法扩增出编码CRP单克隆抗体蛋白的轻重链核酸序列并构建重组质粒,质粒转染到Expi 293细胞中制备出单克隆抗体蛋白.结果:用间接ELISA法筛选出两个具有良好特异性的单克隆抗体20#,22#,将这两个抗体配对并建立ELISA双抗体夹心检测方法,CRP浓度在15～250 ng/ml范围内有较好的检测线性(y=0.003x-0.0358,R2=0.9974),精密度分析的批内变异系数CV为6.7％ ～9.37％,批间变异系数为8.52％ ～9.10％,平均回收率为98％,与临床血清检测值具有良好的相关性,达到CRP检测要求.结论:本研究所用的单个B细胞分离分选方法结合Expi 293真核表达系统在制备单克隆抗体方面具有省时、高效、特异性好、灵敏度高的特点,具有很好的应用价值.
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通过流式分选技术筛选HIV-1特异性单个B细胞
目的 探讨流式细胞分选技术在筛选HIV-I抗原特异性单个B细胞中的应用.方法 通过HIV-1特异性探针结合多色流式细胞技术,标记HIV-1抗原特异性B细胞;并结合单细胞流式分选,从两例HIV-1慢性感染者体内分离抗原特异性单个B细胞.结果 两个样本均有较强的中和活性,可以用作筛选中和抗体.两例感染者经流式分选后分别获得探针特异性目的细胞CD3-、CD8-、INDO-1 VIOLET-、CD14-、CD19+、CD20+、IgM-、IgG+、JRFLgp140+、JRFLgp140-D368R-各33和20个.结论 通过流式分选技术结合HIV-1特异性探针可以获得单个HIV-1抗原特异性B细胞,为后续获得有广谱中和HIV-1能力的抗体,设计抗HIV-1药物和HIV-1疫苗免疫原提供技术支持.
