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重组蛋白ClpP2文献资料
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结核分枝杆菌Rv2460 c基因的克隆,表达及编码产物的免疫特性分析
目的：：对结核分枝杆菌Rv2460c基因(编码ClpP2蛋白)进行克隆,表达,并评价其编码产物的免疫原性。方法：扩增结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Rv 的Rv2460c基因,构建重组质粒pET32a(+)-ClpP2,用IPTG诱导表达,利用亲和层析法进行纯化。用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白ClpP2的表达和鉴定。用生物信息学对Mtb ClpP2的免疫原性分析和表位预测。酶联免疫吸附法( ELISA)测定兔和TB病人血清anti-ClpP2滴度。结果：重组ClpP2蛋白酶在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经 bandscan 软件分析纯化蛋白的纯度为93%。生物信息学分析Mtb ClpP2蛋白具有多个优势B细胞表位和T细胞表位。 ELISA法测定兔抗血清效价为1∶64000；检测肺结核病人血清中anti-ClpP2抗体水平高于健康对照人群。结论：成功纯化了重组蛋白ClpP2和制备了特异性兔抗ClpP2多克隆抗体,实验和信息学均表明Mtb ClpP2蛋白酶有较强的免疫原性。
