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α-HL文献资料
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金黄色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表达
目的：表达纯化可溶性金黄色葡萄球菌α-溶血素（α-HL）作为抗原，用以后期制备全人源抗α-HL抗体，为金黄色葡萄球菌感染提供新的治疗手段。方法：提取金黄色葡萄球菌总RNA，经反转录聚合酶链反应（ RT-PCR）技术，扩增α-HL cDNA，将cDNA双酶切后与载体pCold-TF连接，转化E.coli TOPO 10，菌落PCR及测序验证插入基因的正确性。将测序正确的α-HL／pCold-TF重组质粒转化E.coli BL21进行低温诱导表达，SDS-PAGE和Western blot验证表达产物的正确性。结果：PCR扩增得到的α-HL基因大小为900 bp左右；将重组质粒α-HL／pCold-TF转化E.coli BL21，经15℃低温诱导表达24 h ，诱导得到可溶性的α-HL融合蛋白，融合蛋白大小为90 kD左右（载体上的TF 分子伴侣大小为45 kD左右）；经Western blot 验证表达纯化的蛋白为α-HL融合蛋白。将纯化的α-HL蛋白注射BABL／c小鼠制备抗血清，结果显示抗血清与金黄色葡萄球菌结合良好，效价大于10000倍。结论：成功对α-HL进行了基因克隆，并成功表达纯化到可溶性的α-HL融合蛋白。
