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人单核细胞趋化因子受体5(CCR5)N-端膜外第一襻特异抗体F(ab′)2的制备及鉴定
目的:研究人β趋化因子受体5(huCCR5)NH2 端膜外第一襻特异抗体F(ab′)2的制备及鉴定方法.方法:计算机分析定位超基因家族中同源顺序低的结构域NH2 端膜外第一襻,PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX-1N中,经测序鉴定正确后,在E.coli中表达,纯化后免疫新西兰白兔.经A蛋白-Sepharose CL-4B亲和层析纯化后,用胃蛋白酶消化IgG,经S-200凝胶过滤柱分离制备F(ab′)2.结果:经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2 端的特异性抗体.结论:这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′)2的制备方法,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法.
