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高脂饮食诱导胰岛素抵抗小鼠血浆 microRNA表达谱及其与 TLR4的关系
目的：：筛选高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠,以及应用Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)抑制剂TAK-242干预的胰岛素抵抗小鼠血浆差异表达的微小RNA( microRNA,miRNA),探讨胰岛素抵抗、TLR4和差异表达miRNAs的关系。方法：血浆标本来自前期实验的3组小鼠,即以普通基础饲料喂养( Low fat diet,LFD)的正常对照组、给予TAK-242的高脂饮食组( Treated high fat diet,HFD-T)和单纯高脂饮食组HFD-C,应用小鼠miRNA芯片检测血浆miRNA表达谱,筛选差异表达的miRNAs；采用实时荧光定量PCR方法验证芯片结果。应用生物信息学方法,以TLR4及其信号传导通路为中心,预测差异表达miRNAs的靶基因,并对靶基因分别进行GO和KEGG富集分析,以判定差异miRNAs主要影响的生物学功能或者通路。结果：miRNA基因芯片筛查结果显示,单纯高脂饮食组与正常饮食组比对,筛选出差异显著的miRNAs共计185种,其中6种miRNAs表达上调,179种miRANs表达下调；给予TAK-242的高脂饮食组与正常饮食组比对,筛选出差异显著的miRANs共计171种,均表达下调；给予TAK-242的高脂饮食组与单纯高脂饮食组比对,筛选出差异表达的miRNAs共计13种,均为下调。生物信息学分析结果显示,以TLR4为中心挖掘与其互作的蛋白质,共发现有10种蛋白；在TAK-242给予的高脂饮食组与单纯高脂饮食组中差异表达倍数均在1000以上的4种miRNAs ( mmu-miR-3095-3p、mmu-miR-5113、mmu-miR-709和mmu-miR-335-3p),可在TLR4的互作蛋白质或Toll样受体信号通路中找到其作用的靶基因,发现这些靶基因74%属于生物过程基因,其中转录调控因子占82%。实时荧光定量PCR检测mmu-miR-3095-3p、mmu-miR-5113、mmu-miR-709和mmu-miR-335-3p水平,变化趋势与芯片结果一致。结论：胰岛素抵抗发生时,血浆miRNAs表达谱存在改变,此变化与TLR4及其信号通路相关。该研究结果丰富了胰岛素抵抗发生的机制,为寻找胰岛素抵抗血浆miRNAs诊断标志物提供了实验依据。
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宫颈鳞癌MicroRNA差异表达的研究
目的:利用杂交芯片技术筛选宫颈鳞癌发病相关微小RNA(miRNA).方法:本研究为双盲实验,选择2011年10月在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科接受检查、治疗的9例患者为研究对象,其中,晚期宫颈浸润癌(A组)3例,中早期浸润癌(B组)3例,正常对照(C组)3例.留取治疗前宫颈组织,分组用杂交芯片检查1 450种miRNA,分析组间差异表达的miRNA.采用实时荧光定量PCR测定miR-16、miR-21、miR-34a水平,对芯片结果进行初步验证.结果:(1)在表达水平较高的miRNA中,共有90种miRNA在三组间存在差异表达,其中,在癌组织中高表达的有miR-1275、hsa-miR-1290、miR-2392、miR-3149、miR-3934、miR-3945、miR-4299、miR-4455、miR-4484、miR-4653-3p、miR-4667-5p、miR-4725-3p、miR-4792、miR-513a-5p、miR-574-5p、miR-765等;低表达的有:miR-100、miR-125a-5p、miR-125b、miR-126、miR-143、miR-145、miR-203、miR-26a、miR-3185、miR-4324、miR-4467等.(2)实时荧光定量PCR检测miR-21、miR-34a相对表达水平(内参miR-16),结果与杂交芯片一致,两种检测方法无统计学差别.结论:miRNA在宫颈鳞癌组织与正常宫颈组织间存在差异表达,miRNA表达谱分析将为宫颈癌的诊断和治疗提供新的依据.
