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激活TLR5和NLRC4通路对小鼠先天免疫细胞的影响
目的：探讨用重组鞭毛素蛋白同时或者分别激活C57BL/6小鼠模型TLR5和NLRC4通路对小鼠先天免疫细胞的影响。方法：首先，表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC（同时激活TLR5和NLRC4两条通路)； FliCΔ90-97（不能激活TLR5通路)；FliC-L3A（不能激活NLRC4通路)；FliCΔ90-97：L3A（两条通路都不激活)。将小鼠分为5组，分别为：PBS组、FliC组、FliC-L3A组、FliCΔ90-97和FliCΔ90-97：L3A组。分别用PBS和10μg重组鞭毛素蛋白腹腔注射C57BL/6小鼠，每组3只。12 h后收集腹腔灌洗液，流式抗体染色检测腹腔灌洗液中的中性粒细胞和NK细胞的比例。同时，取小鼠脾脏制成脾细胞悬液，流式抗体染色检测DC表面共刺激分子CD80和CD86的表达情况及脾细胞中调节性T细胞（ Treg)的比例。结果：激活TLR5（FliC组和FliC-L3A组)和NLRC4通路（FliCΔ90-97组)小鼠的腹腔灌洗液中中性粒细胞和NK细胞的比例都显著高于PBS组和FliCΔ90-97：L3A组（P<0．01)。激活TLR5通路的FliC组和FliC-L3A组的DC表面CD80和CD86表达水平显著高于 PBS 组、FliCΔ90-97和 FliCΔ90-97：L3A 组（P<0．01)。 FliC-L3A 组调节性 T 细胞的比例高于其他组（P<0．05)。结论：激活TLR5和NLRC4通路可以趋化中性粒细胞、NK细胞，两条通路激活对中性粒、NK细胞有相同的趋化能力。鞭毛素蛋白只有激活TLR5通路才可以上调DCs表面共刺激分子CD80和CD86，促进DCs的成熟。
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激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用
目的:探究激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用.方法:表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白FliC(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、FliC△90-97(不能激活TLR5通路)、FliC-L3A(不能激活NLRC4通路)和Flic△90-97:L3A(两条通路都不激活).用不同浓度的重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞,72 h后,利用CCK8法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,并计算抑制率.软琼脂形成实验:每孔细胞数为1 000个MCF-7细胞铺于6孔板中,重组鞭毛素蛋白浓度为1μg/ml,培养14 d后,结晶紫染色,显微镜下计数克隆数,计算克隆形成率.结果:四种鞭毛素蛋白在0.1μg/ml的浓度刺激下,对MCF-7细胞的抑制率达到30％,FliC△90-97对MCF-7的抑制作用是剂量依赖的.在lμg/ml时单独激活TLR5的FliC-L3A鞭毛素蛋白的抑制率高于全长的FliC和单独激活NLRC4的FliC△90-97.FliC△90-97:L3A也对MCF-7细胞有抑制作用.四种鞭毛素蛋白对MDA-MB-231细胞在加转染试剂之后才表现出抑制效应.结论:鞭毛素蛋白可以抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,其机制可能是由于分别激活胞膜和胞内的除TLR5和NLRC4以外的其他通路.
